Стр. 6
Страницы:
Стр.1 |
Стр.2 |
Стр.3 |
Стр.4 |
Стр.5 |
Стр.6
относительно устойчивы, тогда как IgМ- и IgА-антитела
инактивируются, что позволяет определить удельное содержание
IgG-антител в сыворотке.
Рекомендуется использовать L-цистеин сернокислый или цистеин
(чистый) отечественный, либо "Reanal" (Венгрия).
Раствор цистеина готовят ex tempore (15 мг на 1 мл
растворителя). Солянокислый цистеин растворяют в 0,1N растворе NaOH
с таким расчетом, чтобы рН готового раствора был равен 7,0-7,2.
Цистеин сначала растворяют в небольшом количестве 0,1N раствора NаОН
и при значении рН 7,0-7,2 доводят до нужного объема 0,85-процентным
раствором хлорида натрия. Контроль за рН раствора обязателен.
Раствор цистеина может храниться не более 30-60 мин. Ввиду возможных
отклонений активности цистеина необходимо уточнять для каждой серии
препарата рабочую концентрацию раствора цистеина на сыворотках,
заведомо содержащих IgМ- и IgG-антитела.
Для исследования необходимо получить 0,2-0,4 мл цельной
сыворотки, которую делят на две части. Одну часть разводят 1:5
забуференным 0,85-процентным раствором хлорида натрия, смешивают с
равным объемом раствора цистеина, помещают в пробирку и заливают
слоем стерильного вазелинового масла (или помещают во флакончик с
резиновой пробкой так, чтобы между содержимым и пробкой оставалось
минимальное пространство во избежание окисления цистеина кислородом
воздуха). Вторую часть сыворотки (без цистеина) разводят
забуференным 0,85-процентным раствором хлорида натрия 1:10, заливают
слоем вазелинового масла и помещают во флакончик с резиновой
пробкой. Пробирки (флаконы) с сыворотками, обработанные и не
обработанные цистеином, выдерживают в термостате при 37°С в течение
18 ч. Далее обе части сыворотки титруют в нескольких парных рядах
соответственно числу эритроцитарных диагностикумов, начиная с
разведения 1:20, в пробирках, полистироловых панелях, "планшетах для
иммунологических реакций однократного применения" или планшетах
микротитратора Такачи в объеме 0,05 или 0,1 мл. Для разведения
используют забуференный 0,85-процентный раствор хлорида натрия
(фосфатный буфер, рН 7,0-7,2). Однако предпочтительней готовить
0,85-процентный раствор хлорида натрия с нормальной прогретой при
56°С в течение 30 мин сывороткой (кроличьей, лошадиной, крупного
рогатого скота). Нормальную сыворотку добавляют из расчета 1 мл на
100 мл изотонического раствора при условии, что в этом разведении
будут отсутствовать антитела к применяемым диагностикумам, что
проверяется предварительно для каждой новой серии сыворотки.
В качестве эритроцитарных сальмонеллезных диагностикумов
используют: эритроцитарный Vi-диагностикум, диагностикумы
эритроцитарные сальмонеллезные О-антигенные А-1, -2, -12; В-1, -4,
-12; Д-1, -9, -12. Все серии эритроцитарных диагностикумов
предварительно контролируют с прилагаемой к диагностикуму
контрольной сывороткой.
Целесообразно одновременно исследовать сыворотку для выделения
всех групп антител (О, Н, Vi) к брюшнотифозным и паратифозным
бактериям. Диагностикумы в рабочем разведении вносят в каждую лунку
разведения сыворотки в равном объеме (0,05 или 0,1). Каждый
диагностикум вносят в два ряда разведений сыворотки (обработанной и
необработанной цистеином). В одну из лунок, содержащую растворитель
без испытуемой сыворотки (0,05-0,1 мл), вносят равный объем
диагностикума для контроля спонтанной агглютинации.
Планшеты помещают в термостат при 37°С на 2 ч, после чего
учитывают результаты по обычной для РПГА методике.
При учете результатов РПГА с цистеином нужно учитывать, что для
выявления бактерионосителей имеет значение не столько абсолютный
титр антител, сколько удельное содержание в сыворотке IgG-антител.
Если обработка цистеином не снижает титр или снижает его только на
одно или два разведения, то это говорит о значительном содержании в
сыворотке крови IgG-антител.
Например, титр Vi-антител в необработанной сыворотке 1:320, а в
обработанной 1:160 или 1:80, титр суммарных О-антител в
необработанной сыворотке - 1:160, а в обработанной - 1:320 или
1:160. Такие результаты дают основание заподозрить острое или
хроническое бактерионосительство. При этом следует учитывать, что у
хронических бактерионосителей могут быть и более высокие, и более
низкие титры, но разница между содержанием суммарных и IgG-антител
должна быть минимальной, особенно для Vi- и Н-антител. В некоторых
случаях у хронических носителей О-антитела могут быть чувствительны
к цистеину, но Vi- и Н-антитела устойчивы. У небольшого числа
бактерионосителей (5-10%) бактерии брюшного тифа могут не содержать
Vi-антиген, вследствие чего отсутствуют Vi-антитела. В таких случаях
оценивают только титр О- и Н-антител. Так же поступают при
диагностике носителей паратифозных бактерий.
Если при обработке цистеином титр антител значительно снижается
или цистеинустойчивые антитела не определяются, то такое лицо скорее
всего не является хроническим бактерионосителем.
РПГА с цистеином может быть с успехом использована с целью
дифференцировки транзиторных носителей от хронических, а также
привитых от хронических бактерионосителей, поскольку у привитых
однократно или двукратно большая часть антител относится к IgМ,
которые инактивируются цистеином.
Методику постановки РПГА с определением цистеинустойчивых
антител при массовых обследованиях необходимо разделить на два
этапа.
На первом этапе ставится РПГА с сыворотками, не обработанными
цистеином (с диагностикумами групп А, В, Д и Vi-диагностикумом).
Сыворотки с положительными результатами реакции отбираются,
обрабатываются цистеином.
На втором этапе проводится постановка с сыворотками,
обработанными цистеином. Используется только тот диагностикум, с
которым на первом этапе получен положительный результат.
Начальник Главного управления
гигиены, эпидемиологии и
профилактики Минздрава
Республики Беларусь Ф.А.Германович
Страницы:
Стр.1 |
Стр.2 |
Стр.3 |
Стр.4 |
Стр.5 |
Стр.6
|
