Стр. 3
Страницы:
Стр.1 |
Стр.2 |
Стр.3 |
Стр.4 |
Стр.5
структур);
ферментативная обработка белковых структур;
контрастирование;
микроскопия;
учет результатов.
26.2. Оборудование, реактивы и приготовление растворов
- согласно приложению 15.
26.3. Постановка реакции проводится в следующем порядке:
26.3.1. отбирают образец ткани головного мозга (лобная,
височная, затылочная, теменная части коры полушарий большого мозга,
кора мозжечка, подкорковые ядра) массой 5 г;
26.3.2. образцы мозга измельчают и тщательно гомогенизируют в
гомогенизаторе Даунса (20 тракций);
26.3.3. готовят 10% мозговую суспензию на растворе 1 согласно
приложению 15 с добавлением 1-2 капель изопропанола и центрифугируют
при 22000 х g, 30 минут, 4°С;
26.3.4. отбирают надосадочную жидкость и центрифугируют при
215000 х g, 2 часа, 4°С;
26.3.5. осадок гомогенизируют в гомогенизаторе Даунса (20
тракций) и разводят раствором 2 в соответствии с приложением 15;
26.3.6. суспензию центрифугируют при 215000 x g, 2,5 часа, 4°С;
26.3.7. полученный осадок растворяют в том же растворе (раствор
2), добавляют протеиназу К до конечной концентрации 20 мкг/мл и
инкубируют в течение 2 часов при 37°С;
26.3.8. после ферментативного протеолиза материал помещают в
эппендорф и центрифугируют при 6000 оборотов/минуту, 15 мин при 4°С;
26.3.9. осадок разводят буфером STE, рН 7,4 и повторно
центрифугируют при 6000 оборотов/минуту, 15 минут при 4°С;
26.3.10. подобную операцию желательно проводить еще 1-2 раза,
при этом потери белка составляют не более 5 процентов;
26.3.11. результирующий осадок разводят в 50 мкл буфером STE,
рН 7,4 и хранят до использования при -20°С;
26.3.12. аликвоту полученной суспензии (5-10 мкл) наносят на
электронно-микроскопические сеточки, покрытые формваруглеродной
подложкой, и инкубируют 1 минуту при комнатной температуре;
26.3.13. затем сеточки промывают дистиллированной водой (5 раз
по 30 секунд);
26.3.14. для контрастирования сеточки помещают в 5% раствор
уранил ацетата на 15-20 минут, затем интенсивно промывают под
проточной дистиллированной водой и высушивают на фильтровальной
бумаге;
26.3.15. исследование образцов проводят на электронном
микроскопе при ускоряющем напряжении 80 кВ и инструментальном
увеличении 15000-60000;
26.3.16. учет результатов проводят после обработки, в
исследуемых образцах центральной нервной системы сохраняются только
аномальные PrP-структуры, в виде везикул, глобул, палочек и
филаментов, состоящие из белка PrP27-32. Обычно PrP-структуры
представлены относительно однородной по морфологии популяцией
палочкообразных частичек диаметром от 10 до 25 нм и длиной от
100-200 до 500 нм. Выявление в исследуемых образцах аномальных
PrP-структур позволяет судить о наличии прионовой инфекции в ЦНС.
27. Диагностика прионовых инфекций методом ультратонких срезов
осуществляется путем обнаружения дегенеративно-деструктивных
изменений в тканях ЦНС методом электронной микроскопии.
27.1. Исследование проводят в следующем порядке:
фиксация материала;
обезвоживание;
полимеризация;
ультрамикротомия;
контрастирование;
микроскопия;
учет результатов.
27.2. Оборудование, реактивы и приготовление растворов
- согласно приложению 16.
27.3. Постановка реакции проводится в следующем порядке:
27.3.1. из ткани мозга (лобная, височная, затылочная, теменная,
части коры полушарий большого мозга, кора мозжечка, подкорковые ядра
и т.д.) вырезают кусочки объемом 0,5 куб.см и немедленно помещают в
пробирку с 2,5% глутаровым альдегидом на 5-10 минут при 0°С;
27.3.2. извлеченные из глутарового альдегида кусочки мозга
нарезают бритвенным лезвием на блоки объемом 1 куб.мм и снова
помещают в 2,5% глутаровый альдегид на 2 часа при +4°С;
27.3.3. фиксированные кусочки мозга промывают в 3 сменах
фосфатного буфера, охлажденного до +4°С, в течение 15 минут;
27.3.4. кусочки мозга дополнительно фиксируют в течение 1 часа
в 1% ОsО4;
27.3.5. для обезвоживания кусочки мозга помещают в 70% этанол
по 10 минут 2 раза; 96% этанол - по 10 минут 2 раза; 100% этанол -
по 20 минут 2 раза; ацетон - по 20 минут 2 раза;
27.3.6. обезвоженные кусочки мозга помещают в смесь аралдитов,
разведенную равным объемом ацетона, на 12 часов при комнатной
температуре;
27.3.7. кусочки мозга переносят 3-4 часа в смесь аралдитов с
добавлением 4% дибутилфтолата;
27.3.8. кусочки мозга помещают в капсулы, заливают свежей
смесью аралдитов на 24 часа при +70°С для полимеризации;
27.3.9. блоки с образцами затачивают в виде пирамидки
бритвенным лезвием под контролем бинокулярной лупы;
27.3.10. срезы готовят на ультрамикротоме и помещают на опорные
электронно-микроскопические сеточки;
27.3.11. для контрастирования сеточки со срезами помещают в 5%
раствор уранил ацетата на 15-20 минут, затем интенсивно промывают
под проточной дистиллированной водой и высушивают на фильтровальной
бумаге;
27.3.12. в чашку Петри вносят каплю раствора цитрата свинца и
рядом с каплей помещают 5-7 гранул NаОН или КОН;
27.3.13. электронно-микроскопическую сеточку помещают срезом
вниз в каплю раствора на 15-20 минут, промывают водой и высушивают;
27.3.14. исследование ультратонких срезов проводят на
электронном микроскопе при ускоряющем напряжении 80 кВ при
увеличении 15000, 30000, 45000;
27.3.15. учет результатов при диагностике прионовой инфекции в
ЦНС методом ультратонких срезов основывается на обнаружении
дегенеративно-деструктивных изменений в нейронах головного, реже
спинного, мозга, спонгиоза серого и белого вещества мозга,
астроглиоза (гипертрофии астроцитов и их пролиферации) и амилоидоза
(отложение амилоидных бляшек в стенках сосудов и паренхиме мозга).
Обнаружение этих патогномических признаков заболевания
свидетельствует о развитии прионовой инфекции в ЦНС.
Глава 9. Выявление прионового белка PrP27-32 методом
иммунного блотинга
28. Исследование проводят в следующем порядке:
приготовление исходных концентрированных и рабочих растворов;
обработка исследуемых проб;
приготовление пластины 12% ДСН-полиакриламидного геля;
электрофорез прионов;
перенос PrP с полиакриламидного геля на нитроцеллюлозную бумагу
и приготовление полос шириной 0,5 см;
обработка нитроцеллюлозных полос исследуемыми образцами ЦНС;
учет результатов.
28.1. Оборудование, реактивы и приготовление растворов -
согласно приложению 17.
28.2. Постановка реакции осуществляется следующим обоазом:
28.2.1. концентрированный препарат PrP27-32 в объеме 100-120
мкл и содержанием белка 500 мкл (5 мг/мл) обрабатывают лизирующим
буфером в количестве 1/4 от объема образца и вирусные белки
разгоняются в додецилсульфате натрия - полиакриламидном геле
(далее - ДСН-ПААГ) (электрофорез проводится по методу Лэммли).
Электрофорез проводят в течение 16-18 часов при напряжении 40 В и
силе тока 7 мA;
28.2.2. после окончания электрофореза гель осторожно снимается
со стекла. С одного края обрезается полоска геля шириной 2 см для
проверки качества разделения белков;
28.2.3. остальная часть геля замачивается на 30 минут в буфере
для переноса, здесь же замачивается нитроцеллюлозный фильтр,
крупнопористая фильтровальная бумага и поролоновые прокладки;
28.2.4. после истечения указанного периода времени готовится
кассета для переноса белков на нитроцеллюлозную мембрану. Для этого
на поролоновую прокладку последовательно укладывают крупнопористый
фильтр, нитроцеллюлозную бумагу, гель, фильтровальную бумагу и опять
поролоновую прокладку. Вся кассета зажимается плотно между двумя
пористыми пластинами из оргстекла;
28.2.5. кассета опускается в камеру для переноса
(нитроцеллюлозная мембрана со стороны (+), гель со стороны (-),
которая заливается тотчас буфером для переноса;
28.2.6. электрофорез проводят в течение 2 часов при напряжении
160 В и силе тока 550 мА;
28.2.7. после окончания электрофореза нитроцеллюлозные мембраны
промываются в фосфатном буфере (далее - PBS) с 0,05% Твин-20 в
течение 30 минут. С одного края мембраны отрезается полоска шириной
5 мм и окрашивается 0,2% амидо черным для проверки качества
переноса;
28.2.8. нитроцеллюлоза высушивается на воздухе и хранится между
листами фильтровальной бумаги при +4°С до использования.
Исследуемые образцы (лизаты мозга, селезенки) в разведении 1:10
в твин-фосфатном буфере (далее - TS-PBS) с 1% этилового спирта
добавляют к стрипам шириной 5 мм и инкубируют при 16-18°С при
комнатной температуре, стрипы отмывают 3 раза TS-PBS и инкубируют в
течение 1 часа с коммерческими моноклональными антителами IgG при
37°С в TS-PBS. Затем стрипы опять трижды отмываются TS-PBS и реакция
визуализируется путем добавления к стрипам субстрата (PBS - 0,5
мг/мл диаминобензидин и 0,5 мг/мл H2О2) до появления полос. Реакция
останавливается промыванием стрипов под водопроводной водой. После
высушивания стрипов на воздухе проводится учет результатов.
Выявление специфических полос в стрипах, соответствующих по
электрофоретической подвижности контрольному образцу PrP, дает
основание судить о наличии прионовой инфекции в ткани ЦНС.
Отсутствие специфических PrP-полос в стрипах рассматривают как
отрицательный результат.
Глава 10. Дифференциальный диагноз
29. Губкообразную энцефалопатию крупного рогатого скота
необходимо дифференцировать от бешенства, листериоза, болезни
Ауески, нервной формы инфекционного ринотрахеита, злокачественной
катаральной горячки, а также отравлений фосфорорганическими,
хлорорганическими, ртутьорганическими соединениями, фосфидом цинка,
мышьяком, поваренной солью.
Основными отличительными признаками от губкообразной
энцефалопатии крупного рогатого скота являются короткий латентный
период (от 5 до 15 дней), острое или подострое течение, повышение
температуры тела, отказ от корма и другие симптомы, присущие
указанным заболеваниям, биопроба, данные вирусологических,
бактериологических и токсикологических исследований.
30. Бешенство - острая контагиозная болезнь различных видов
животных и человека, характеризующаяся параличами, агрессией,
водобоязнью.
Возбудитель - рабдовирус.
Бешенство крупного рогатого скота чаще протекает в буйной форме
и характеризуется возбуждением, извращением аппетита, расширением
зрачков, обильным слюноотделением. Агрессивность по отношению к
человеку и животным наблюдается редко. К концу болезни развиваются
параличи - спазм гортани и глотки, затем передних и задних
конечностей. Смерть наступает на 3-6 день. При тихой форме бешенства
симптомы возбуждения выражены в незначительной степени, но очень
рано развиваются параличи.
Необходимо отметить, что прижизненная дифференциальная
диагностика губкообразной энцефалопатии крупного рогатого скота и
бешенства, несмотря на всю ее значимость, имеет лишь ориентировочное
значение. Основное практическое значение имеет посмертная
диагностика, основанная на данных морфологического, серологического
исследования и биопробы.
Гистологические изменения головного и спинного мозга при
бешенстве характеризуются рассеянным энцефаломиелитом, проявляющимся
воспалительными изменениями сосудов и поражением нервных клеток.
Указанные изменения для бешенства неспецифичны и при диагностике
играют второстепенную роль согласно приложениям 18 и 19.
Специфическим является обнаружение в цитоплазме нейронов головного
мозга особых образований, названных тельцами Бабеша-Негри, наиболее
часто они обнаруживаются в клетках аммонова рога, реже - в других
отделах. Тельца Бабеша-Негри представляют собой полиморфные
образования со сложной внутренней структурой: в середине одно или
несколько плотных гранул, по периферии - более мелкие зернышки.
Размеры телец колеблются от 0,25-1 до 20-25 микрон. В одной клетке
может быть одно или несколько телец различной величины и формы
согласно приложению 20.
Для обнаружения телец Бабеша-Негри в гистосрезах, мазках и
отпечатках мозга предложено множество способов окраски последних: по
Михину, Муромцеву, Манну, Ленцу, Адуцкевичу.
Из серологических методов исследования наиболее специфичным при
бешенстве является метод флюоресцирующих антител, позволяющий
выявлять при наличии вируса в мозгу специфическое свечение (разной
величины и формы гранулы яркого желто-зеленого цвета величиной от
едва заметных образований до 15-20 микрон).
При отрицательных результатах, полученных морфологическими и
серологическими методами, для окончательной постановки диагноза
проводится биологическая проба, основанная на заражении исследуемым
материалом лабораторных животных, главным образом белых мышей. С
этой целью суспензией мозга 1:10 с добавлением антибиотиков заражают
в мозг 5-6 белых мышей весом 4-6 г в дозе 0,03 мл. Наблюдение за
животными проводят в течение 14 дней. В случае падежа животных их
мозг исследуют на наличие телец Бабеша-Негри. Если в течение 14 дней
у зараженных животных не будут выявлены тельца Бабеша-Негри, то
результат считается отрицательным.
31. Болезнь Ауески (псевдобешенство) - контиагиозная болезнь
домашних и диких животных, в том числе и крупного рогатого скота,
сопровождается поражением центральной нервной системы и органов
дыхания.
Возбудителем является герпесвирус. Вирус обладает
пантропностью, инкубационный период от 1 до 15 дней. У крупного
рогатого скота вначале повышается температура тела до 41,9°С,
прекращается жвачка, появляется сильный зуд в области ноздрей, губ,
щек или глаз, реже - на других участках тела. Животные вялые,
отказываются от корма, беспокоятся, непрерывно лижут зудящие места,
трутся об окружающие предметы. Возбуждение нарастает, глаза выражают
испуг, животное мычит, стонет, рвется с привязи (агрессивности не
проявляет). Нередко наблюдаются судорожные сокращения жевательных и
шейных мышц.
При вскрытии у животных расчесы в области головы, спины,
конечностей. На месте расчесов кожа гиперемирована, края раны
отечные, подкожная клетчатка геморрагически инфильтрирована. При
гистологическом исследовании в мозгу отмечается картина негнойного
менингоэнцефалита. Он характеризуется образованием диффузной и
очаговой пролиферации клеток глии, периваскулярной инфильтрацией,
клетками ретикулоэндотериального типа, вакуолизацией и пикнозом
ганглиозных нервных клеток, нейрофагией, многорядовой пролиферацией
клеток мозговых оболочек и боковых желудочков согласно приложениям
18 и 19.
Лабораторная диагностика болезни Ауески заключается в
обнаружении и идентификации возбудителя болезни в патологическом
материале (реакцией иммунофлуоресценции или иммуноферментного
анализа), выделении вируса на культуре клеток с последующей его
типизацией, а также обнаружении противовирусных антител в сыворотке
крови от больных и переболевших животных в реакции непрямой
гемагглютинации, иммуноферментном анализе, реакции нейтрализации.
32. Листериоз - инфекционная болезнь, протекающая с признаками
сепсиса, поражения центральной нервной системы, половых органов и
молочной железы.
Возбудителем инфекции является Listeria monocytogenes.
Инкубационный период длится 1-4 недели. Течение болезни бывает
острое, подострое и хроническое. Листериоз может проявляться
несколькими формами: нервной, септической, смешанной, бессимптомной
или выражаться в виде поражения половых органов и молочной железы. У
крупного рогатого скота и овец отмечается преимущественное поражение
центральной нервной системы. Первые признаки характеризуются
угнетением, снижением аппетита, в дальнейшем (1-7 дней) проявляются
некоординированность движений, круговые движения, потеря равновесия,
судороги, парезы отдельных групп мышц, потеря зрения, конъюнктивит,
стоматит, оглумоподобное состояние, иногда приступы буйства. В
начальной стадии болезни температура тела может быть несколько
повышена или не превышать физиологической нормы, длительность
болезни 7-10 дней и в большинстве случаев животные погибают.
При вскрытии у крупного рогатого скота отмечают острую венозную
гиперемию и отек легких, гистогнойный энцефалит (стволовая часть
головного мозга и шейная часть спинного мозга) согласно приложениям
21 и 22.
Диагноз на листериоз устанавливают на основе
эпизоотологических, клинических, патологоанатомических и
лабораторных методов исследований.
Основанием для постановки диагноза является выделение
возбудителя на питательных средах, его идентификация, биопроба на
белых мышах и кроликах. Для серологической диагностики используют
сыворотки крови от больных и переболевших животных. Наличие антител
выявляют в реакции агглютинации, реакции связывания комплемента,
иммуноферментном анализе. Для ускорения диагностики используют
люминесцентную микроскопию с использованием гипериммунной
антилистериозной сыворотки, меченной флюорохромами.
33. Злокачественная катаральная горячка крупного рогатого скота
- острая инфекционная болезнь крупного рогатого скота,
характеризующаяся поражением слизистой оболочки головы, глаз и
нервной системы.
Возбудитель - герпесвирус.
Начальная стадия заболевания характеризуется высокой
температурой в течение 1-2 дней, воспалением слизистых оболочек
ротовой и носовой полостей. Из носа появляются истечения слизистого,
затем гнойно-кровянистого секрета. Повышенная температура тела
(40-42°С) держится на постоянном уровне на протяжении болезни.
Смерть может наступить через 24 часа, иногда через 2 недели и более.
Летальность - 90%.
Патологоанатомические измерения зависят от тяжести и
продолжительности заболевания и характеризуются катарально-гнойным
конъюнктивитом и кератитом, некрозом эпидермиса носового зеркальца и
слизистой оболочки ротовой полости, гнойно-фибринозным ринитом,
ларингитом, крупозно-геморрагическим или дифтеритическим колитом.
При гистологическом исследовании головного мозга - негнойный
менингоэнцефалит согласно приложениям 18 и 19.
Методы диагностики основаны на выделении и идентификации вируса
на культуре клеток и обнаружении специфических антител в реакции
иммунодиффузии, реакции непрямой гемагглютинации или
иммуноферментном анализе.
34. Инфекционный ринотрахеит - острое инфекционное заболевание
крупного рогатого скота, характеризующееся поражением органов
дыхания и пищеварения у молодняка и половых органов у взрослых
животных, также менингоэнцефалитом у телят.
Возбудитель - герпесвирус.
Заболеваемость животных инфекционным ринотрахеитом зависит от
локализации вируса, его вирулентности, возраста, пола и
физиологического состояния животного. Отмечены респираторная,
энтеральная, генитальная, конъюнктивальная и нервная формы течения
инфекционного ринотрахеита. Наиболее часто встречается у
новорожденных телят энтеральная форма, у телят старше 1 месяца -
респираторная, конъюнктивальная, реже - нервная формы, у взрослых -
генитальная форма.
Нервная или менингоэнцефалитная форма инфекционного
ринотрахеита возникает у животных после проникновения вируса через
гематоэнцефалический барьер. Ее наблюдают редко и, как правило, у
молодняка 2-6 месяцев. Она характеризуется расстройством
двигательных функций и нарушением равновесия. Болезнь сопровождается
мышечным тремором, мычанием, скрежетом зубов, конвульсиями,
слюнотечением.
На вскрытии у животных с менингоэнцефалитной формой
инфекционного ринотрахеита в головном мозге гиперемия сосудов,
отечность тканей и мелкие кровоизлияния. При гистологическом
исследовании - хорошо выраженный лимфоцитарный менингоэнцефалит. Ему
сопутствуют периваскулярная лимфоцитарная инфильтрация в различных
отделах полушарий и мозжечка, сильная инъекция сосудов и отечность
вещества мозга. У животных, которые погибают, в веществе мозга
преобладают кровоизлияния, а при затяжном течении болезни -
дегенеративные изменения нервных клеток и клеточно-пролиферативные
процессы глиальных элементов согласно приложениям 18 и 19.
Диагноз на инфекционный ринотрахеит ставят путем выделения и
идентификации вирусов на культуре клеток, обнаружения
противовирусных антител в сыворотках крови больных и переболевших
животных в реакции нейтрализации, реакции непрямой гемагглютинации
или иммуноферментном анализе.
35. Отравления мочевиной характеризуется сильным угнетением,
потливостью, атаксией, слюнотечением, клоническими и тетаническими
судорогами. Отравлению подвержены в основном взрослые животные.
Температура тела в норме. Заболевают единичные животные до 30-40%-го
поражения стада.
На вскрытии - геморрагический гастроэнтерит, вздутие рубца (при
разрезе ощущается резкий запах аммиака), зернистая (жировая)
дистрофия печени и некрозы в ней. Основанием для постановки диагноза
являются лабораторные исследования содержимого рубца на наличие в
нем мочевины.
36. Отравление ртутьорганическими соединениями характеризуется
резким угнетением, сильной саливацией, поносом, полиурией,
угнетением сердечной деятельности, атаксией, парезами, параличами.
Температура тела в норме. Заболевают единичные животные до массовых
случаев поражения стада.
На вскрытии - серозно-катаральный гастроэнтерит, некротический
некроз, зернистая (жировая) дистрофия миокарда и печени,
крупозно-дифтеретический колит, кровоизлияния в серозных оболочках
пищеварительного тракта.
Основанием для постановки диагноза являются лабораторные
исследования содержимого рубца на наличие в нем соединений ртути.
37. Отравление хлорорганическими соединениями характеризуется
резким угнетением или возбуждением, сильной саливацией, поносом,
полиурией, судорогами, сердечной недостаточностью, парезами,
параличами. Температура тела в норме. Заболевают единичные животные
до массовых случаев поражения стада.
На вскрытии - катарально-геморрагический гастроэнтерит,
кровоизлияния в слизистой оболочке бронхов, плевре, под эпи- и
эндокардом, зернистая дистрофия и венозная гиперемия в миокарде,
печени, почках, венозная гиперемия и отек легких.
Основанием для постановки диагноза являются
химико-токсикологические лабораторные исследования содержимого рубца
на наличие в нем хлорорганических соединений.
38. Отравление фосфорорганическими соединениями характеризуется
расстройством нервной системы, повышенной возбудимостью, затем
угасанием рефлексов, атаксией, сильной саливацией, поносом,
судорогами, сердечной недостаточностью. Температура тела в норме.
Заболевают единичные животные до массовых случаев поражения стада.
При вскрытии - обильная саливация в ротовой полости, цианоз
слизистых оболочек глаз и ротовой полости, венозная гиперемия печени
и легких (отек легких), гиперемия и отек головного мозга, сужение
зрачков, кровоизлияния под эпи- и эндокардом, в слизистой оболочке
мочевого пузыря, щитовидной и поджелудочной железах, головном
мозге.
Основанием для постановки диагноза являются
химико-токсикологические лабораторные исследования содержимого рубца
на наличие в нем хлорорганических соединений.
39. Наряду с поражением крупного рогатого скота губкообразной
энцефалопатией аналогичные изменения отмечаются и у овец при скрепи,
аденоматозе, висна.
39.1. При аденоматозе овец наряду с головным мозгом поражаются
и легкие. При этом отмечают метаплазию альвеолярного эпителия в виде
онкоподобных аденом на фоне расплавления межальвеолярных перегородок
и образования эмфизематозных полостей согласно приложению 23.
39.2. При заболевании овец висна отмечают периваскулярный
инфильтрат крупноклеточных элементов в стволовой части
продолговатого мозга согласно приложению 24.
39.3. При скрепи овец имеются различные стадии поражения
головного мозга. Отмечают кариопикноз, коагуляцию и пониженную
оксифилию цитоплазмы нейронов согласно приложению 25, цитокариолизис
нейронов согласно приложению 26, хроматолизис ядра и вакуолизацию
цитоплазмы нейронов согласно приложению 27, лизис цитоплазмы и
оттеснение остатков ядра к периферии нейрона. Иногда отмечают
наиболее характерный патогномоничный признак - перстневидный нейрон
согласно приложению 28.
39.4. При меди овец отмечается пролиферация круглоклеточных
элементов в интерстициальной ткани легких, перибронхим, расплавление
межальвеолярных перегородок и образование эмфиземоподобных полостей
согласно приложению 29.
39.5. При проведении гистологических исследований в нормальных
участках головного мозга преобладают волокна нейроглии, заметны
нейроны согласно приложениям 11 и 12. При микроскопии гистосрезов из
мозжечка здоровых животных при микроскопии видны грушевидные клетки
Пуркинье, зернистый слой с мелкими нейронами, молекулярный слой
(немиелизированные волокна), нейроны согласно приложению 13.
Глава 11. Установление окончательного диагноза на
губкообразную энцефалопатию крупного рогатого скота
40. Подтвержденным на губкообразную энцефалопатию крупного
рогатого скота диагноз следует считать только на основании
комплексного анализа эпизоотологических, клинико-анатомических и
патогистологических исследований. При этом следует сравнивать
гистопрепараты отделов головного мозга, полученные от заведомо
здоровых животных и от животных с различными поражениями центральной
нервной системы, согласно приложениям 8-13 и 18-29.
41. Подтверждением диагноза на губкообразную энцефалопатию
крупного рогатого скота является заключение региональной референтной
лаборатории Международного эпизоотического бюро, расположенной во
Всероссийском научно-исследовательском институте защиты животных
(г.Владимир, Российская Федерация), путем исследования
иммуногистохимическим методом наличия патологических PrP-белков в
обычных фиксированных в формалине срезах участков головного мозга
крупного рогатого скота с наиболее характерными патогномоничными
признаками, характерными для этого заболевания, выявленными после
патогистологических исследований.
Глава 12. Меры безопасности при работе с патологическим материалом
при проведении диагностических исследований
42. При работе с патологическим материалом, содержащим
возбудитель губкообразной энцефалопатии крупного рогатого скота,
необходимо учитывать высокую устойчивость возбудителя к
физико-химическим факторам и в этой связи строго соблюдать правила
техники безопасности.
43. Все работы, связанные с распиловкой головы, извлечением
головного мозга, отбором проб для патогистологических,
бактериологических и вирусологических исследований, следует
проводить в соответствии с требованиями санитарных правил 1.2.011
"Безопасность работы с микроорганизмами I и II групп патогенности",
утвержденных постановлением Главного санитарного врача Республики
Беларусь от 25 ноября 1998 г. № 25 "Об утверждении санитарных правил
работы с микроорганизмами I и II групп патогенности".
44. Специалист, который проводит исследования, должен иметь
халат, прорезиненный (лучше хлорвиниловый) фартук с нарукавниками,
анатомические перчатки, резиновые сапоги, водонепроницаемый капюшон,
защитную маску из оргстекла для исключения попадания на лицо или
глаза брызг крови, осколков костной ткани и интрацеребральной
жидкости.
45. По окончании работ необходимо обработать настойкой йода или
бриллиантовой зелени ногти и различные царапины или травмы рук.
Также по окончании работ инструменты, которыми проводили отделение
головы, укладываются в стерилизатор с 2-процентным раствором
гипохлорида натрия не менее чем на 1 час (инструменты должны быть
погружены в раствор полностью). Сапоги, фартук, капюшон, маску и
перчатки также обрабатывают 2-процентным раствором гипохлорида
натрия. Халаты обрабатывают автоклавированием при 132°С в течение 60
минут. Горючие отходы сжигают.
46. Труп животного, а также и голову (после отбора мозга)
рекомендуется утилизировать в яме Беккари или в яме глубиной не
менее 2 метров, предварительно обильно засыпав хлорной известью, или
сжигать. Неиспользованные участки головного мозга целесообразно
сжечь в муфельной печи, а при ее отсутствии утилизировать, как труп
Страницы:
Стр.1 |
Стр.2 |
Стр.3 |
Стр.4 |
Стр.5
|
