Право
Загрузить Adobe Flash Player
Навигация
Новые документы

Реклама

Законодательство России

Долой пост президента Беларуси

Ресурсы в тему
ПОИСК ДОКУМЕНТОВ

Постановление Министерства сельского хозяйства и продовольствия Республики Беларусь, Министерства здравоохранения Республики Беларусь от 13.03.2001 N 9/15 "Об утверждении нормативных правовых актов по борьбе с губкообразной энцефалопатией крупного рогатого скота" (вместе с "Инструкцией по мерам профилактики и борьбы с губкообразной энцефалопатией крупного рогатого скота", "Инструкцией по диагностике губкообразной энцефалопатии крупного рогатого скота")

Текст документа с изменениями и дополнениями по состоянию на 10 июля 2009 года

Архив

< Главная страница

Стр. 3


Страницы: | Стр.1 | Стр.2 | Стр.3



7. Арендит 0,64 - катализатор, Serva;

8. Дибутилдифтолат - пластификатор, Serva;

9. Уранил ацетат, Serva

10. Цитрат свинца, Serva

11. Тотрат калия, Serva

12. Едкий натр (NaOH) (ГОСТ 4328-77)

13. Натрий фосфорнокислый (NaHPO4 и Na2НРО4 х 2Н20) (ГОСТ 4172-76)

14. Тетраоксид осмия OsO4 (О5500, Sigma)

Приготовление растворов

Все растворы готовятся на бидистиллированной воде.

1. 70% этанол (100 мл 96 град. этанола + 28 мл Н2О).

2. 100% этанол хранится в посуде с селикогелем или получают из 96 град. этанола путем обезвоживания (100 мл 96 град. этанола + 20 г CuSO4 х 5Н2О, прожженного при 100 град. С в течение 30 - 40 мин).

3. 2,5% глутаральдегид (10 мл 25% глутаральдегида + 90 мл фосфатного буфера).

4. Смесь аралдитов. Равные объемы (20 мл) аралдита 964 и аралдита 212 тщательно перемешивают, предварительно нагрев до 60 град., добавляют 0,8 мл аралдита 964 и 1,2 мл дибутилфтолата и вновь тщательно перемешивают в течение 20 - 30 минут.

5. 5% уранил ацетат (0,5 мл уранил ацетата + 7 мл метанола + 3 мл Н2О).

6. Раствор цитрата свинца (40 мг NaOH растворить в 10 мл Н2О + 20 мл тортрата калия + 40 мг цитрата свинца).

7. 1% тетраоксид осмия (1,3 г тетраоксида осмия растворить в 50 мл Н2О и хранить в темном месте). Перед употреблением добавить 50 мл фосфатного буфера.

8. Фосфатный буфер pH 7,2 (28 мл 0,2 М NaH2РО4 + 72 мл 0,2 М Na2НРО4).











Приложение 17

к Инструкции по диагностике

губкообразной энцефалопатии

крупного рогатого скота



ОБОРУДОВАНИЕ, РЕАКТИВЫ И ПРИГОТОВЛЕНИЕ РАСТВОРОВ

ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ГУБКООБРАЗНОЙ ЭНЦЕФАЛОПАТИИ КРУПНОГО

РОГАТОГО СКОТА МЕТОДОМ ИММУНОБЛОТИНГА



Оборудование

1. Автоматические пипетки с переменным объемом на 1 мл, 0,2 мл и 0,02 мл

2. Наконечники к пипеткам 1 мл и 0,2 мл

3. Пластиковые центрифужки одноразового применения на 1,5 мл

4. Центрифуга настольная типа ОПН-8

5. Центрифуга лабораторная типа ЦЛР

6. Холодильник бытовой с морозильной камерой -18 град. С ("Минск-15")

7. Лабораторная посуда

8. pH-метр

9. Источник тока (ПЭФ-3, УИП-2)

10. Прибор для вертикального электрофореза

11. Герметичные коробки для фиксации и окраски гелей

12. Прибор для переноса белков с ДСН-ПААГ на нитроцеллюлозные мембраны

13. Герметичные коробки для обработки нитроцеллюлозных мембран

14. Целлофановая пленка

15. Фильтровальная бумага

16. Термостат

17. Водяная баня

18. Весы технические 10 - 200 г

19. Весы аналитические

20. Аппарат для встряхивания АВЧ-6С (РФ)

Реактивы

1. Трис-(гидрооксиметил)-аминометан (ТУ 6-09-4292-76)

2. HCl концентрированная (ГОСТ 3118-77)

3. Глицин (ГОСТ 5860-75)

4. Акриламид (ТУ 6-09-14-1576-73)

5. Метиленбисакриламид (ТУ 6-09-10-1234-77)

6. Додецилсульфат натрия (ТУ 6-09-06-805-76)

7. Аммония персульфат (ГОСТ 20478-75)

8. TEMED (N,N,N,N-тетраметилэтилендиамин) (T9281, Sigma)

9. Бромфеноловый синий (ТУ11П-282-71; ТУ 6-09-4530-77)

10. В-меркаптоэтанол (ТУ 6-09-08-1024-75)

11. Глицерин (ГОСТ 6259-75)

12. Мочевина (ГОСТ 6691-77)

13. Этиловый спирт C2H5OH (ГОСТ 18300-87)

14. Уксусная кислота ледяная (ГОСТ 61-75)

15. Глицерин (ГОСТ 6259-75)

16. Амидо черный 10В (N3393, Sigma)

17. Мембрана нитроцеллюлозная "Миллипор"-НА (Франция, "Schleicher & Schuell" ВАД-0,45 мкм; ФРГ, ВА-85-0,45 мкм)

18. Твин-20 (P7949, Sigma)

19. Бычий сывороточный альбумин (A2153, Sigma)

20. 3,3'-диаминобензидин тетрагидрохлорид (D7304, Sigma)

21. Моноклональные антитела к иммуноглобулинам крупного рогатого скота, меченные пероксидазой хрена

22. Положительные и отрицательные контрольные сыворотки

Приготовление растворов

Все растворы готовят на бидистиллированной воде.

1. Раствор мономеров: 45 г акриламида; 1,2 г N,N-метиленбисакриламида и 0,15 г ДСН растворяют в 105 мл Н2О, фильтруют.

2. Буфер для разделительного геля: 13,6 г трис, 0,2 г ДСН растворяют в 180 мл Н2О, доводят концентрированной HCl до pH 8,8, объем доводят H2О до 200 мл.

3. Буфер для фокусирующего геля: 1,68 г трис, 0,1 г ДСН растворяют в 90 мл Н2О, доводят концентрированной HCl до pH 6,8 (осторожно) и доводят H2О до 100 мл.

4. Электродный буфер, 10-кратный: 144 г глицина, 10 г ДСН растворяют в 900 мл Н2О, доводят сухим трисом (10 г) до pH 8,3 и общий объем - до 1 л.

5. Лизирующий буфер: 10 мл буфера для фокусирующего геля (pH 6,8), 5 мл - b-меркаптоэтанола, 2 г ДСН и 5 мл Н2О. Лизирующий буфер добавляют к пробе в количестве 1/4 от объема образца.

6. Маркерная краска: 200 мг "бромфенолового голубого" растворяют в буфере для образца, добавляют 50 мг глицерина, объем доводят до 100 мл.

7. Буфер для образца: 0,84 г трис растворяют в 90 мл Н2О, доводят концентрированной HCl до pH 6,8 и Н2О до 100 мл.

8. Разделительный гель. Для приготовления 10% разделительного геля смешивают 10 мл раствора мономеров, 20 мл буфера для разделительного геля (для приготовления 12% разделительного геля берут соответственно 12 мл и 18 мл). Добавляют 0,015 мг персульфата аммония и 0,075 мл TEMED в разведении 1/10. Смесь перемешивают и заливают в пластину для электрофореза. Сверху осторожно наслаивают 1 мл дистиллированной воды и оставляют при комнатной температуре. О завершении полимеризации геля судят по появлению четкого раздела между гелем и водой. После завершения полимеризации воду сливают и поверхность геля осторожно осушают фильтровальной бумагой.

9. Фокусирующий гель, 5%. Смешивают 1,5 мл раствора мономеров и 9 мл буфера для фокусирующего геля, добавляют 6 мг персульфата аммония и 0,05 мл TEMED в разведении 1/10.

10. Буфера для переноса:

буфер А: 0,3 М трис pH 10,4;

буфер Б: 25 мМ трис pH 10,4;

буфер В: 40 мМ аминокапроновая кислота, 25 мМ трис pH 9,4.

11. Трис-буфер pH 7,4 (ТБ), 10-кратный сток-раствор: 6,05 г трис, 0,5 г азида натрия и 45 г хлористого натрия. Растворяют в 400 мл H2О, доводят pH до 7,4 концентрированной HCl. Доводят объем буфера до 500 мл.

12. Промывочный буфер. Смешивают 10 мл 10-кратного сток-раствора ТБ и 90 мл H2О. Добавляют 50 мкл Твин-20, перемешивают.

13. Блокирующий раствор: 1 г БСА растворяют в 50 мл H2О, добавляют эмбриональную сыворотку 10 мл и 10 мл 10-кратного ТБ. Объем доводят до 100 мл H2О, перемешивают.

14. Раствор субстрата: 10 мл 10-кратного ТБ и 90 мл H2О. Вносят 30 мг бензидина, смесь нагревают на водяной бане до полного растворения диаминобензидина, охлаждают до комнатной температуры и добавляют 0,1 мл 30% H2О2. Раствор субстрата готовят непосредственно перед использованием.











Приложение 18

к Инструкции по диагностике

губкообразной энцефалопатии

крупного рогатого скота



НЕГНОЙНЫЙ ЭНЦЕФАЛИТ



***** НА БУМАЖНОМ НОСИТЕЛЕ



Диффузная инфильтрация круглоклеточными элементами

нейроглии, сглаживание структуры мозга, вакуолизация

отсутствует (окраска гематоксилинэозином, 300x)











Приложение 19

к Инструкции по диагностике

губкообразной энцефалопатии

крупного рогатого скота



НЕГНОЙНЫЙ ЭНЦЕФАЛИТ



***** НА БУМАЖНОМ НОСИТЕЛЕ



Диффузная инфильтрация круглоклеточными элементами

нейроглии, сглаживание структуры мозга, вакуолизация

отсутствует (окраска гематоксилинэозином, 600x)











Приложение 20

к Инструкции по диагностике

губкообразной энцефалопатии

крупного рогатого скота



БЕШЕНСТВО



***** НА БУМАЖНОМ НОСИТЕЛЕ



Наличие в аммоновом рогу патогномоничных оксифильных

(красных) округлых телец Бабеша-Негри (окраска по

Муромцеву, 600x)











Приложение 21

к Инструкции по диагностике

губкообразной энцефалопатии

крупного рогатого скота



ГНОЙНЫЙ ЭНЦЕФАЛИТ ПРИ ЛИСТЕРИОЗЕ



***** НА БУМАЖНОМ НОСИТЕЛЕ



Цитокариопикноз и лизис нейронов, диффузная инфильтрация

нейроглии лимфоидными и частично нейтрофильными

элементами (окраска гематоксилинэозином, 300x)











Приложение 22

к Инструкции по диагностике

губкообразной энцефалопатии

крупного рогатого скота



ГНОЙНЫЙ ЭНЦЕФАЛИТ ПРИ ЛИСТЕРИОЗЕ



***** НА БУМАЖНОМ НОСИТЕЛЕ



Цитокариопикноз и лизис нейронов, диффузная инфильтрация

нейроглии лимфоидными и частично нейтрофильными элементами

(окраска гематоксилинэозином, 300x)











Приложение 23

к Инструкции по диагностике

губкообразной энцефалопатии

крупного рогатого скота



АДЕНОМАТОЗ ОВЕЦ



***** НА БУМАЖНОМ НОСИТЕЛЕ



Метаплазия альвеолярного эпителия в виде онкоподобных

аденом на фоне расплавления межальвеолярных перегородок

и образования эмфизематозных полостей (окраска

гематоксилинэозином, 300x)











Приложение 24

к Инструкции по диагностике

губкообразной энцефалопатии

крупного рогатого скота



ВИСНА ОВЕЦ



***** НА БУМАЖНОМ НОСИТЕЛЕ



Патогномоничный периваскулярный инфильтрат

крупноклеточных элементов в стволовой части

продолговатого мозга (окраска гематоксилинэозином,

300x)











Приложение 25

к Инструкции по диагностике

губкообразной энцефалопатии

крупного рогатого скота



СКРЕПИ ОВЕЦ



***** НА БУМАЖНОМ НОСИТЕЛЕ



Кариопикноз, каогуляция и пониженная оксифилия

цитоплазмы нейронов (окраска гематоксилинэозином, 300x)











Приложение 26

к Инструкции по диагностике

губкообразной энцефалопатии

крупного рогатого скота



СКРЕПИ ОВЕЦ



***** НА БУМАЖНОМ НОСИТЕЛЕ



Цитокариолизис нейронов (окраска гематоксилинэозином, 300x)











Приложение 27

к Инструкции по диагностике

губкообразной энцефалопатии

крупного рогатого скота



СКРЕПИ ОВЕЦ



***** НА БУМАЖНОМ НОСИТЕЛЕ



Хроматолизис ядра и вакуолизация цитоплазмы нейронов

(окраска гематоксилинэозином, 300x)











Приложение 28

к Инструкции по диагностике

губкообразной энцефалопатии

крупного рогатого скота



СКРЕПИ ОВЕЦ



***** НА БУМАЖНОМ НОСИТЕЛЕ



Лизис цитоплазмы и оттеснение остатков ядра к периферии

нейрона. Характерный патогномоничный признак -

перстневидный нейрон (окраска гематоксилинэозином, 300x)











Приложение 29

к Инструкции по диагностике

губкообразной энцефалопатии

крупного рогатого скота



МЕДИ ОВЕЦ



***** НА БУМАЖНОМ НОСИТЕЛЕ



Пролиферация круглоклеточных элементов в

интерситициальной ткани легких, перибронхит,

расплавление межальвеолярных перегородок и образование

эмфиземоподобных полостей (окраска гематоксилинэозином, 300x)









Страницы: | Стр.1 | Стр.2 | Стр.3




< Главная страница

Новости законодательства

Новости Спецпроекта "Тюрьма"

Новости сайта
Новости Беларуси

Полезные ресурсы

Счетчики
Rambler's Top100
TopList