Стр. 2
Страницы: | Стр.1 | Стр.2 | Стр.3 |
Глава 11. УСТАНОВЛЕНИЕ ОКОНЧАТЕЛЬНОГО ДИАГНОЗА НА
ГУБКООБРАЗНУЮ ЭНЦЕФАЛОПАТИЮ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
40. Подтвержденным на губкообразную энцефалопатию крупного рогатого скота диагноз следует считать только на основании комплексного анализа эпизоотологических, клинико-анатомических и патогистологических исследований. При этом следует сравнивать гистопрепараты отделов головного мозга, полученные от заведомо здоровых животных и от животных с различными поражениями центральной нервной системы, согласно приложениям 8 - 13 и 18 - 29.
41. Подтверждением диагноза на губкообразную энцефалопатию крупного рогатого скота является заключение региональной референтной лаборатории Международного эпизоотического бюро, расположенной во Всероссийском научно-исследовательском институте защиты животных (г.Владимир, Российская Федерация), путем исследования иммуногистохимическим методом наличия патологических PrP-белков в обычных фиксированных в формалине срезах участков головного мозга крупного рогатого скота с наиболее характерными патогномоничными признаками, характерными для этого заболевания, выявленными после патогистологических исследований.
Глава 12. МЕРЫ БЕЗОПАСНОСТИ ПРИ РАБОТЕ С ПАТОЛОГИЧЕСКИМ
МАТЕРИАЛОМ ПРИ ПРОВЕДЕНИИ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ
42. При работе с патологическим материалом, содержащим возбудитель губкообразной энцефалопатии крупного рогатого скота, необходимо учитывать высокую устойчивость возбудителя к физико-химическим факторам и в этой связи строго соблюдать правила техники безопасности.
43. Все работы, связанные с распиловкой головы, извлечением головного мозга, отбором проб для патогистологических, бактериологических и вирусологических исследований, следует проводить в соответствии с требованиями санитарных правил 1.2.011 "Безопасность работы с микроорганизмами I и II групп патогенности", утвержденных постановлением Главного санитарного врача Республики Беларусь от 25 ноября 1998 г. N 25 "Об утверждении санитарных правил работы с микроорганизмами I и II групп патогенности".
44. Специалист, который проводит исследования, должен иметь халат, прорезиненный (лучше хлорвиниловый) фартук с нарукавниками, анатомические перчатки, резиновые сапоги, водонепроницаемый капюшон, защитную маску из оргстекла для исключения попадания на лицо или глаза брызг крови, осколков костной ткани и интрацеребральной жидкости.
45. По окончании работ необходимо обработать настойкой йода или бриллиантовой зелени ногти и различные царапины или травмы рук. Также по окончании работ инструменты, которыми проводили отделение головы, укладываются в стерилизатор с 2-процентным раствором гипохлорида натрия не менее чем на 1 час (инструменты должны быть погружены в раствор полностью). Сапоги, фартук, капюшон, маску и перчатки также обрабатывают 2-процентным раствором гипохлорида натрия. Халаты обрабатывают автоклавированием при 132 град. С в течение 60 минут. Горючие отходы сжигают.
46. Труп животного, а также и голову (после отбора мозга) рекомендуется утилизировать в яме Беккари или в яме глубиной не менее 2 метров, предварительно обильно засыпав хлорной известью, или сжигать. Неиспользованные участки головного мозга целесообразно сжечь в муфельной печи, а при ее отсутствии утилизировать, как труп животного.
Приложение 1
к Инструкции по диагностике
губкообразной энцефалопатии
крупного рогатого скота
ИНСТРУМЕНТЫ, ПРИМЕНЯЕМЫЕ ДЛЯ ВСКРЫТИЯ ЧЕРЕПНОЙ КОРОБКИ
***** НА БУМАЖНОМ НОСИТЕЛЕ
Приложение 2
к Инструкции по диагностике
губкообразной энцефалопатии
крупного рогатого скота
СХЕМА РАСПИЛОВ ЧЕРЕПА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
***** НА БУМАЖНОМ НОСИТЕЛЕ
Приложение 3
к Инструкции по диагностике
губкообразной энцефалопатии
крупного рогатого скота
СХЕМА УЧАСТКОВ ГОЛОВНОГО МОЗГА ЖИВОТНЫХ
***** НА БУМАЖНОМ НОСИТЕЛЕ
Приложение 4
к Инструкции по диагностике
губкообразной энцефалопатии
крупного рогатого скота
СХЕМА РАЗРЕЗОВ ГОЛОВНОГО МОЗГА
***** НА БУМАЖНОМ НОСИТЕЛЕ
Приложение 5
к Инструкции по диагностике
губкообразной энцефалопатии
крупного рогатого скота
АППАРАТУРА, МАТЕРИАЛЫ И ИНСТРУМЕНТЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ДЛЯ
ГИСТОЛОГИЧЕСКОЙ ОБРАБОТКИ И ОКРАСКИ ТКАНЕЙ
1. Автомат универсальный (типа АТ-4, АТ-5) для гистологической обработки и окраски тканей
2. Термостат суховоздушный (на 37 град. С)
3. Термостат для парафиновой заливки ТВЗ-25 (на 58 - 60 град. С)
4. Микротом санный (мс) или для парафиновых срезов (МПС-2)
5. Станок для заточки микротомных ножей
6. Станок для правки микротомных ножей
7. Микротомные ножи (для парафиновых или целлоидиновых срезов)
8. Формалин (коммерческий), параформ
9. Спирт 96 град. (этанол)
10. Медь сернокислая (5-водная или безводная)
11. Хлороформ
12. Уксусная кислота (ледяная)
13. Гематоксилин (или гематеин)
14. Эозин калия или натрия
15. Соляная кислота
16. Ксилол (пара-, орто-, мета-)
17. Фенол (карболовая кислота)
18. Иглы препаровальные гистологические (стоматологический зонд)
19. Белковый клей
20. Блоки деревянные (или текстолитовые)
21. Плитка электрическая (газовая горелка)
22. Спиртовки
23. Часы песочные на 1, 2, 3, 5, 10 минут
24. Карандаш по стеклу (тушь черная, чернила по стеклу)
25. Бальзам канадский (пихтовый)
26. Предметные и покровные стекла
27. Фильтровальная бумага (фильтры)
Приложение 6
к Инструкции по диагностике
губкообразной энцефалопатии
крупного рогатого скота
ПРИГОТОВЛЕНИЕ РАЗЛИЧНЫХ КОНЦЕНТРАЦИЙ СПИРТОВ
ДЛЯ ГИСТОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ
----------------------------+----------------------------------------¬
¦ ¦ Необходимое количество компонентов, мл ¦
¦Для получения 100 мл спирта+------+------+------+------+------+-----+
¦ ¦ 96 град. ¦ воды ¦ 90 град. ¦ воды ¦ 80 град. ¦ воды¦
¦ ¦спирта¦ ¦спирта¦ ¦спирта¦ ¦
+---------------------------+------+------+------+------+------+-----+
¦50 град. ¦ 52 ¦ 48 ¦ 44 ¦ 56 ¦ 50 ¦ 50 ¦
+---------------------------+------+------+------+------+------+-----+
¦60 град. ¦ 63 ¦ 37 ¦ 50 ¦ 50 ¦ 56 ¦ 44 ¦
+---------------------------+------+------+------+------+------+-----+
¦70 град. ¦ 73 ¦ 27 ¦ 56 ¦ 44 ¦ 63 ¦ 37 ¦
+---------------------------+------+------+------+------+------+-----+
¦75 град. ¦ 78 ¦ 22 ¦ 83 ¦ 17 ¦ 94 ¦ 6 ¦
+---------------------------+------+------+------+------+------+-----+
¦80 град. ¦ 83 ¦ 17 ¦ 89 ¦ 11 ¦ - ¦ - ¦
+---------------------------+------+------+------+------+------+-----+
¦90 град. ¦ 94 ¦ 6 ¦ - ¦ - ¦ - ¦ - ¦
¦---------------------------+------+------+------+------+------+------
Приложение 7
к Инструкции по диагностике
губкообразной энцефалопатии
крупного рогатого скота
ДЕФЕКТЫ ПРИ ИЗГОТОВЛЕНИИ ПАРАФИНОВЫХ СРЕЗОВ, МЕТОДЫ ИХ
УСТРАНЕНИЯ
---+------------------------+-----------------------+----------------¬
¦N ¦ Дефект ¦ Причина ¦Метод устранения¦
+--+------------------------+-----------------------+----------------+
¦1 ¦ 2 ¦ 3 ¦ 4 ¦
+--+------------------------+-----------------------+----------------+
¦1.¦Залитый кусочек выпадает¦1. Недостаточное ¦Повторная ¦
¦ ¦из парафина при резке ¦обезвоживание материала¦заливка ¦
¦ ¦ ¦2. Неполное удаление ¦материала ¦
¦ ¦ ¦промежуточных сред ¦ ¦
¦ ¦ ¦3. Охлаждение кусочка ¦ ¦
¦ ¦ ¦при переносе его в ¦ ¦
¦ ¦ ¦форму ¦ ¦
¦ ¦ ¦4. Заливка материала ¦ ¦
¦ ¦ ¦охлажденным парафином ¦ ¦
+--+------------------------+-----------------------+----------------+
¦2.¦Материал плохо режется, ¦1. Переуплотнение ¦Устранить ¦
¦ ¦нож подскакивает над ¦материала при проводке ¦трудно. ¦
¦ ¦поверхностью блока, ¦и фиксации ¦Поставить ¦
¦ ¦поверхность среза ¦ ¦микротомный нож ¦
¦ ¦неровная ¦ ¦под углом к ¦
¦ ¦ ¦ ¦блоку и ¦
¦ ¦ ¦ ¦попытаться ¦
¦ ¦ ¦ ¦получить ¦
¦ ¦ ¦ ¦одиночные срезы ¦
+--+------------------------+-----------------------+----------------+
¦3.¦Срезы хрупкие, крошатся ¦1. Твердый парафин ¦Повторно залить ¦
¦ ¦ ¦2. Низкая температура ¦материал в более¦
¦ ¦ ¦окружающей среды ¦мягкий парафин ¦
¦ ¦ ¦3. Большой угол наклона¦(или добавить ¦
¦ ¦ ¦ножа ¦воск). ¦
¦ ¦ ¦ ¦Прогревать ¦
¦ ¦ ¦ ¦дыханием ¦
¦ ¦ ¦ ¦поверхность ¦
¦ ¦ ¦ ¦блока перед ¦
¦ ¦ ¦ ¦каждым движением¦
¦ ¦ ¦ ¦ножа или ¦
¦ ¦ ¦ ¦включить сбоку ¦
¦ ¦ ¦ ¦настольную ¦
¦ ¦ ¦ ¦лампу. ¦
¦ ¦ ¦ ¦Уменьшить угол ¦
¦ ¦ ¦ ¦наклона ножа ¦
+--+------------------------+-----------------------+----------------+
¦4.¦Срезы закручиваются, ¦1. Мягкий парафин ¦Охладить блок в ¦
¦ ¦прилипают к поверхности ¦2. Высокая температура ¦холодильнике ¦
¦ ¦ножа ¦окружающей среды ¦(2 - 3 мин). ¦
¦ ¦ ¦3. Малый угол наклона ¦Увеличить угол ¦
¦ ¦ ¦ножа ¦наклона ножа ¦
+--+------------------------+-----------------------+----------------+
¦5.¦Срезы раздваиваются или ¦1. Грязный парафин ¦Повторно залить ¦
¦ ¦покрыты белесоватыми ¦2. Зазубрины на лезвии ¦в чистый ¦
¦ ¦полосами ¦ножа ¦парафин. ¦
¦ ¦ ¦ ¦Заточить или ¦
¦ ¦ ¦ ¦передвинуть нож ¦
+--+------------------------+-----------------------+----------------+
¦6.¦Срезы получаются через ¦1. Малый угол наклона ¦Увеличить угол ¦
¦ ¦одно движение ножа ¦ножа ¦наклона ножа ¦
L--+------------------------+-----------------------+-----------------
Приложение 8
к Инструкции по диагностике
губкообразной энцефалопатии
крупного рогатого скота
ГУБКООБРАЗНАЯ ЭНЦЕФАЛОПАТИЯ РОГАТОГО СКОТА
***** НА БУМАЖНОМ НОСИТЕЛЕ
Патогномоничная диффузная вакуолизация нейроглии
стволовой части продолговатого мозга (окраска
гематоксилинэозином, 300x)
Приложение 9
к Инструкции по диагностике
губкообразной энцефалопатии
крупного рогатого скота
ГУБКООБРАЗНАЯ ЭНЦЕФАЛОПАТИЯ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
***** НА БУМАЖНОМ НОСИТЕЛЕ
Патогномоничная диффузная вакуолизация нейроглии
стволовой части продолговатого мозга. Высокая степень
поражения (окраска гематоксилинэозином, 300x)
Приложение 10
к Инструкции по диагностике
губкообразной энцефалопатии
крупного рогатого скота
ГУБКООБРАЗНАЯ ЭНЦЕФАЛОПАТИЯ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
***** НА БУМАЖНОМ НОСИТЕЛЕ
Цитокариопикноз и лизис нейронов. Подобные изменения
наблюдаются и при других инфекционных болезнях с
поражением центральной нервной системы (листериоз,
болезнь Ауески, злокачественная катаральная горячка)
(окраска гематоксилинэозином, 300x)
Приложение 11
к Инструкции по диагностике
губкообразной энцефалопатии
крупного рогатого скота
НОРМАЛЬНЫЕ УЧАСТКИ КОРЫ ПОЛУШАРИЙ ГОЛОВНОГО МОЗГА
***** НА БУМАЖНОМ НОСИТЕЛЕ
Преобладание волокон нейроглии и нейронов
(окраска гематоксилинэозином, 300x)
Приложение 12
к Инструкции по диагностике
губкообразной энцефалопатии
крупного рогатого скота
НОРМАЛЬНЫЕ УЧАСТКИ КОРЫ ПОЛУШАРИЙ ГОЛОВНОГО МОЗГА
***** НА БУМАЖНОМ НОСИТЕЛЕ
Преобладание волокон нейроглии и нейронов
(окраска серебрением по Кохалю, 300x)
Приложение 13
к Инструкции по диагностике
губкообразной энцефалопатии
крупного рогатого скота
МОЗЖЕЧОК ЗДОРОВОГО ЖИВОТНОГО
***** НА БУМАЖНОМ НОСИТЕЛЕ
Грушевидные клетки Пуркинье, зернистый слой с мелкими
нейронами, молекулярный слой (немиелизированные волокна)
нейронов (окраска серебрением по Кохалю, 300x)
Приложение 14
к Инструкции по диагностике
губкообразной энцефалопатии
крупного рогатого скота
ОБОРУДОВАНИЕ, РЕАКТИВЫ И ПРИГОТОВЛЕНИЕ РАСТВОРОВ
ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ ЭЛЕКТРОННОЙ МИКРОСКОПИИ ГУБКООБРАЗНОЙ
ЭНЦЕФАЛОПАТИИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА В
МАЗКАХ-ОТПЕЧАТКАХ
Оборудование
1. Электронный микроскоп (JEM-I00 CX, Япония)
2. Электронно-микроскопические сеточки (Balzera, Union) на 100 или 50 ячеек
3. Иономер (pH-метр)
4. Автоматические пипетки с переменным объемом на 0,02 мл; 1,0 мл
5. Наконечники к автоматическим пипеткам на 0,02 мл; 1,0 мл
6. Бритвенные лезвия "Нева"
7. Лабораторная посуда
8. Весы аналитические
9. Термостат
10. Чашки Петри
11. Фильтровальная бумага
Реактивы
1. Додецилсульфат натрия (L4509, Sigma)
2. Трипсин (Т8003, Sigma)
3. Протеиназа К (Р5056, Sigma)
4. Трис-(гидрооксиметил)-аминометан (Т1378, Sigma)
5. HCl концентрированная (ГОСТ 3118-77)
6. Натрий хлористый (NaCl) (ГОСТ 4233-77)
7. Этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТА) (Е9884, Sigma)
8. Глутаральдегид 25% (G6257, Sigma)
9. Уранил ацетат, Serva
10. Метиловый спирт (метанол) (М3641, Sigma)
Приготовление растворов
Все растворы готовятся на бидистиллированной воде.
1. Фосфатный буфер pH 7,2 (28 мл 0,2 М NaH2РО4 + 72 мл 0,2 М Na2НРО4).
2. Буфер STE, pH 7,4 (0,01 М трис-HCl, pH 7,4, 0,1 М NaCl, 0,001 ЭДТА) - взвешивают навески NaCl (1,4625 г), трис-HCl (0,3028 г) и ЭДТА (0,1041 г), растворяют в бидистиллированной воде, концентрированной HCl, устанавливают pH 7,4 и доводят конечный объем раствора до 250 мл.
3. 2% додецилсульфат натрия - 2 г ДСН растворяют в бидистиллированной воде. Объем доводят до 100 мл.
4. Трипсин (5 мг трипсина растворяют в 10 мл фосфатного буфера).
5. Протеиназа К (2 мг протеиназы К растворяют в 10 мл буфера STE, pH 7,4).
6. 2,5% глутаральдегид (10 мл 25% глутаральдегида + 90 мл фосфатного буфера).
7. 5% уранил ацетат (0,5 мл уранил ацетата + 7 мл метанола + 3 мл Н2О).
Приложение 15
к Инструкции по диагностике
губкообразной энцефалопатии
крупного рогатого скота
ОБОРУДОВАНИЕ, РЕАКТИВЫ И ПРИГОТОВЛЕНИЕ РАСТВОРОВ
ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ПРИОНОВЫХ ПАЛОЧЕК В МАЗКАХ-ОТПЕЧАТКАХ
ЦЕНТРАЛЬНОЙ НЕРВНОЙ СИСТЕМЫ МЕТОДОМ НЕГАТИВНОГО
КОНТРАСТИРОВАНИЯ ПРИ ЭНЦЕФАЛОПАТИИ КРУПНОГО РОГАТОГО
СКОТА
Оборудование
1. Скоростная ультрацентрифуга ("Beckman", Швеция)
2. Микроцентрифуга типа "Eppendorf" (Bio-Rad, США)
3. Электронный микроскоп (JEM-IOO CX, Япония)
4. Электронно-микроскопические сеточки (Balzera, Union) на 100 или 50 ячеек
5. Иономер (pH-метр)
6. Автоматические пипетки с переменным объемом на 0,02 мл; 1,0 мл
7. Наконечники к автоматическим пипеткам на 0,02 мл; 1,0 мл
8. Гомогенизатор Даунса
9. Бритвенные лезвия "Нева"
10. Лабораторная посуда
11. Весы аналитические
12. Термостат
13. Фильтровальная бумага
Реактивы
1. Лаурил саркозин натрия (L9150, Sigma)
2. Изопропаноловый спирт (изопропанол), (L9516, Sigma)
3. Протеиназа К (Р5056, Sigma)
4. Трис-(гидрооксиметил)-аминометан (Т1378, Sigma)
5. HCl концентрированная (ГОСТ 3118-77)
6. Натрий хлористый (NaCl) (ГОСТ 4233-77)
7. Этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТА) (Е9884, Sigma)
8. Глутаральдегид (G6257, Sigma)
9. Уранил ацетат, Serva
10. Метиловый спирт (метанол) (М3641, Sigma)
Приготовление растворов
Все растворы готовятся на бидистиллированной воде.
1. Буфер STE, pH 7,4 (0,01 М трис-HCl, pH 7,4, 0,1 М NaCl, 0,001 ЭДТА) - взвешивают навески NaCl (1,4625 г), трис-HCl (0,3028 г) и ЭДТА (0,1041 г), растворяют в бидистиллированной воде, концентрированной HCl, устанавливают pH 7,4 и доводят конечный объем раствора до 250 мл.
2. Раствор 1 (10 г лаурил саркозина натрия растворяют в буфере STE pH 7,4, объем доводят до 100 мл).
3. Раствор 2 (1 г лаурил саркозина натрия и 10 г NaCl растворяют в буфере STE pH 7,4, объем доводят до 100 мл).
4. Протеиназа К (2 мг протеиназы К растворяют в 10 мл буфера STE, pH 7,4).
5. 2,5% глутаральдегид (10 мл 25% глутаральдегида + 90 мл фосфатного буфера).
6. 5% уранил ацетат (0,5 мл уранил ацетата + 7 мл метанола + 3 мл Н2О).
Приложение 16
к Инструкции по диагностике
губкообразной энцефалопатии
крупного рогатого скота
ОБОРУДОВАНИЕ, РЕАКТИВЫ И ПРИГОТОВЛЕНИЕ РАСТВОРОВ
ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ГУБКООБРАЗНОЙ ЭНЦЕФАЛОПАТИИ КРУПНОГО
РОГАТОГО СКОТА МЕТОДОМ УЛЬТРАТОНКИХ СРЕЗОВ
Оборудование
1. Электронный микроскоп (JEM-IOO CX, Япония)
2. Ультрамикротом (Reichert, Австрия)
3. Прибор для приготовления стеклянных ножей (Inifemaker, Австрия)
4. Желатиновые или полистирольные капсулы (желатиновые - РФ, полистирольные - Beem, США)
5. Электронномикроскопические сеточки (Balzera, Union) на 100 или 50 ячеек
6. Иономер (pH-метр)
7. Автоматические пипетки с переменным объемом на 0,02 мл; 1,0 мл
8. Наконечники к автоматическим пипеткам на 0,02 мл; 1,0 мл
9. Бритвенные лезвия "Нева"
10. Бинокулярная лупа МБС-9, РФ
11. Лабораторная посуда
12. Весы аналитические
13. Термостат
Реактивы
1. Этиловый спирт (этанол) (ГОСТ 18300-87)
2. Метиловый спирт (метанол) (М3641, Sigma)
3. Глутаральдегид (G6257, Sigma)
4. Ацетон (ГОСТ 2603-79)
5. Аралдит (964), Serva
6. Аралдит (212), Serva
Страницы: | Стр.1 | Стр.2 | Стр.3 |
| 
