Стр. 3
Страницы: | Стр.1 | Стр.2 | Стр.3 | Стр.4 |
эхинококкоза
1.2. Echinococcus granulosus возбудитель
гидатидозного
эхинококкоза
2. IV группа
2.1. Strongyloides stercoralis возбудитель
стронгилоидоза
2.2. Enterobius vermicularis возбудитель энтеробиоза
2.3. Trichinella spiralis возбудитель
трихинеллеза
2.4. Opisthorchis felineus возбудитель описторхоза
2.5. Toxocara canis возбудитель токсокароза
2.6. Toxocara mystax возбудитель токсокароза
2.7. Trichocephalus trichiurus возбудитель
трихоцефалеза
2.8. Askaris lumbricoidos возбудитель аскаридоза
человека
2.9. Clonorchis sinensis возбудитель клонорхоза
2.10. Methagonimus jokogowai возбудитель
метагонимоза
2.11. Nanophyetus salmincoli возбудитель нанофиетоза
2.12. Taeniarinchus saginatus возбудитель
тениаринхоза
2.13. Diphyllobotrium latum возбудитель
дифиллоботриоза
2.14. Taenia solium возбудитель тениоза,
цистицеркоза
2.15. Ascaris suum возбудитель аскаридоза
свиней
2.16. Ancylostoma duodenale возбудитель
анкилостомидоза
2.17. Necator americanus возбудитель некатороза
2.18. Filariata возбудитель филяриатоза
Приложение 3
к санитарным правилам
"Безопасность работы с
микроорганизмами
III - IV групп патогенности
и гельминтами"
РЕЖИМ ОБЕЗЗАРАЖИВАНИЯ РАЗЛИЧНЫХ ОБЪЕКТОВ, ЗАРАЖЕННЫХ ИЛИ
ПОДОЗРИТЕЛЬНЫХ НА ЗАРАЖЕНИЕ МИКРООРГАНИЗМАМИ III - IV
ГРУПП ПАТОГЕННОСТИ
----+-----------+--------------------------------+----------------+--------------------+---------------¬
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ Режим ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ обеззараживания ¦ Примечание ¦
¦ ¦ Способ ¦ ¦Обеззараживающее+--------------+-----+ ¦
¦ N ¦обеззаражи-¦ Объект, подлежащий ¦ средство ¦ температура ¦экс- ¦ ¦
¦п/п¦ вания ¦ обеззараживанию ¦ ¦ (°С) / ¦пози-¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ концентрация ¦ция, ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ (%) ¦мин ¦ ¦
+---+-----------+--------------------------------+----------------+--------------+-----+---------------+
¦ 1 ¦ 2 ¦ 3 ¦ 4 ¦ 5 ¦ 6 ¦ 7 ¦
+---+-----------+--------------------------------+----------------+--------------+-----+---------------+
¦ 1 ¦Паровой ¦1. Посуда лабораторная (пипет- ¦Водяной насыщен-¦1,5 кгс/кв.см ¦ 60 ¦Для бактерий, ¦
¦ ¦стерилиза- ¦ки, пробирки, колбы, чашки Пет- ¦ный пар под дав-¦(0,15 МПа) ¦ ¦не образующих ¦
¦ ¦тор (авто- ¦ри, мазки-отпечатки, гребенки ¦лением ¦126 +/- 2 °С ¦ ¦споры микобак- ¦
¦ ¦клав) ¦для сушки культур, шприцы и др.)¦ ¦ ¦ ¦терий, вирусов,¦
¦ ¦ ¦2. Бактериологические посевы ¦ ¦ ¦ ¦хламидий, рик- ¦
¦ ¦ ¦3. Жидкие отходы, смывные воды ¦ ¦ ¦ ¦кетсий и грибов¦
¦ ¦ ¦4. Резиновые пробки, шланги, ¦ ¦2,0 кгс/кв.см ¦ 90 ¦Для бактерий, ¦
¦ ¦ ¦груши для пипетирования заражен-¦ ¦(0,2 МПа) ¦ ¦образующих спо-¦
¦ ¦ ¦ного материала ¦ ¦132 +/- 2 °С ¦ ¦ры ¦
¦ ¦ ¦5. Перчатки резиновые ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦6. Инструменты после вскрытия ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦лабораторных животных ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦7. Трупы животных, подстилочный ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦материал, выделения животных ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦8. Банки и бачки для животных ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦(банки из-под животных с подсти-¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦лочным материалом и выделениями ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦животных) ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦9. Металлические ящики, садки ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦сетчатые, крышки и пр. ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦10. Защитная одежда персонала ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦(халаты, косынки, ватно-марлевые¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦маски, шапочки) ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+---+-----------+--------------------------------+----------------+--------------+-----+---------------+
¦ Примечание. При отсутствии возможности обеззараживания бактериологических посевов в паровом ¦
¦стерилизаторе - погружение на 24 ч в дезинфицирующий раствор или кипячение в течение 30 мин. ¦
+---+-----------+--------------------------------+----------------+--------------+-----T---------------+
¦ 2 ¦Воздушный ¦1. Посуда лабораторная (пипетки,¦Горячий воздух ¦ 180 ¦ 60 ¦ ¦
¦ ¦стерилиза- ¦пробирки, колбы, чашки Петри, ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦тор ¦мазки-отпечатки, гребенки для ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦сушки культур, шприцы) ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦2. Металлические ящики, садки ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦сетчатые, крышки и прочее ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦3. Пинцеты, скальпели, ножницы ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+---+-----------+--------------------------------+----------------+--------------+-----+---------------+
¦ 3 ¦Кипячение ¦1. Посуда лабораторная (пипетки,¦2-процентный ¦ ¦ 30 ¦С момента заки-¦
¦ ¦ ¦пробирки, колбы, чашки Петри, ¦раствор пищевой ¦ ¦ ¦пания воды ¦
¦ ¦ ¦мазки-отпечатки, гребенки для ¦соды ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦сушки культур, шприцы и др.) ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦2. Жидкие отходы, смывные воды ¦То же ¦ ¦ 30 ¦ ¦
¦ ¦ ¦3. Резиновые пробки, шланги, ¦Вода ¦ ¦ 30 ¦ ¦
¦ ¦ ¦груши для пипетирования заражен-¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ного материала ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦4. Перчатки резиновые ¦2-процентный ¦ ¦ 15 ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦раствор пищевой ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦соды ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦5. Пинцеты, скальпели, ножницы ¦То же ¦ ¦ 15 ¦ ¦
¦ ¦ ¦6. Инструменты после вскрытия ¦-"- ¦ ¦ 15 ¦ ¦
¦ ¦ ¦лабораторных животных, мешочки ¦ ¦ ¦ 30 ¦ ¦
¦ ¦ ¦для транспортировки диких грызу-¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦нов ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦7. Защитная одежда персонала ¦2-процентный ¦ ¦ 15 ¦ ¦
¦ ¦ ¦(халаты, косынки, ватно-марлевые¦раствор кальци- ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦маски, шапочки) ¦нированной соды ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦8. Уборочный материал, ветошь ¦или 0,5-процент-¦ ¦ 15 ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ный раствор лю- ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦бого моющего ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦средства ¦ ¦ ¦ ¦
+---+-----------+--------------------------------+----------------+--------------+-----+---------------+
¦ 4 ¦Прокалива- ¦1. Петли для пересева зараженно-¦Пламя горелки ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ние в пла- ¦го материала ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦мени горел-¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ки ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+---+-----------+--------------------------------+----------------+--------------+-----+---------------+
¦ 5 ¦Фламбирова-¦1. Лабораторные столы ¦Спирт этиловый ¦ 96% ¦ ¦15 мл/кв.м ¦
¦ ¦ние горящим¦2. Внутренние поверхности термо-¦технический ¦ ¦ ¦25 мл/кв.м ¦
¦ ¦факелом ¦статов ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦3. Внутренние поверхности холо- ¦ ¦ ¦ ¦25 мл/кв.м ¦
¦ ¦ ¦дильников ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦4. Пинцеты, скальпели, ножницы ¦ ¦ ¦ ¦3 мл на 1 шт. ¦
+---+-----------+--------------------------------+----------------+--------------+-----+---------------+
¦ 6 ¦Погружение ¦1. Защитные очки, фонендоскопы и¦Спирт этиловый ¦ 70% ¦ 30 ¦ ¦
¦ ¦в раствор ¦др. ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+---+-----------+--------------------------------+----------------+--------------+-----+---------------+
¦ 7 ¦Протирание ¦Микроскопы ¦Спирт этиловый ¦ 70% ¦ ¦15 мл/шт. ¦
¦ ¦раствором ¦ ¦технический ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦Незащищенные участки кожи, руки ¦Спирт этиловый ¦ 70% ¦ 2 ¦5 мл ¦
+---+-----------+--------------------------------+----------------+--------------+-----+---------------+
¦ 8 ¦Сжигание ¦1. Трупы лабораторных животных, ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦подстилочный материал, остатки ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦кормов, выделения животных ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦2. Мусор ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+---+-----------+--------------------------------+----------------+--------------+-----+---------------+
¦ 9 ¦Орошение ¦1. Поверхности в помещениях ¦Дезинфицирующие средства отечественного и зарубежного¦
¦ ¦или проти- ¦(пол, стены, двери, подоконни- ¦производства, разрешенные к применению на территории ¦
¦ ¦рание де- ¦ки), мебель, оборудование, шка- ¦Республики Беларусь согласно действующему законода- ¦
¦ ¦зинфицирую-¦фы и другая мебель, помещения ¦тельству ¦
¦ ¦щим раство-¦вивария ¦ ¦
¦ ¦ром ¦2. Лабораторные столы ¦ ¦
¦ ¦ ¦3. Металлические ящики, садки ¦ ¦
¦ ¦ ¦сетчатые, крышки ¦ ¦
¦ ¦ ¦4. Защитные очки, фонендоскопы ¦ ¦
¦ ¦ ¦5. Санитарно-техническое обору- ¦ ¦
¦ ¦ ¦дование ¦ ¦
+---+-----------+--------------------------------+-----------------------------------------------------+
¦10 ¦Замачивание¦1. Уборочный материал (ветошь, ¦Дезинфицирующие средства по пункту 9 настоящего при- ¦
¦ ¦в дезинфи- ¦мочалки и др.) ¦ложения ¦
¦ ¦цирующем ¦2. Защитная одежда персонала ¦ ¦
¦ ¦растворе ¦(халаты, косынки, ватно-марлевые¦ ¦
¦ ¦ ¦маски, шапочки) ¦ ¦
¦ ¦ ¦3. Мазки-отпечатки, мазки из ¦ ¦
¦ ¦ ¦культур микроорганизмов ¦ ¦
+---+-----------+--------------------------------+-----------------------------------------------------+
¦11 ¦Погружение ¦1. Посуда лабораторная (пипетки,¦То же ¦
¦ ¦в дезинфи- ¦пробирки, колбы, чашки Петри, ¦ ¦
¦ ¦цирующий ¦мазки-отпечатки, гребенки для ¦ ¦
¦ ¦раствор ¦сушки культур, шприцы) ¦ ¦
¦ ¦ ¦2. Перчатки резиновые ¦ ¦
¦ ¦ ¦3. Инструменты после вскрытия ¦ ¦
¦ ¦ ¦лабораторных животных ¦ ¦
¦ ¦ ¦4. Банки и бачки для животных ¦ ¦
¦ ¦ ¦(банки из-под животных с подсти-¦ ¦
¦ ¦ ¦лочным материалом и выделениями ¦ ¦
¦ ¦ ¦животных) ¦ ¦
¦ ¦ ¦5. Уборочный материал (ветошь, ¦ ¦
¦ ¦ ¦мочалки) ¦ ¦
+---+-----------+--------------------------------+----------------+--------------+---------------------+
¦12 ¦Засыпать и ¦1. Выделения больного: мокрота, ¦-"- ¦ ¦Для твердых - смешан-¦
¦ ¦размешать ¦фекалии, моча, рвотные массы, ¦ ¦ ¦ные с водой в соотно-¦
¦ ¦ ¦остатки пищи ¦ ¦ ¦шении 1:2, для жидких¦
¦ ¦ ¦2. Жидкие отходы, смывные воды ¦ ¦ ¦- 1:1 ¦
+---+-----------+--------------------------------+----------------+--------------+---------------------+
¦13 ¦Заливание ¦1. Моча, жидкость после ополас- ¦-"- ¦ ¦Соотношение 1:2 ¦
¦ ¦дезинфици- ¦кивания зева ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦рующим ¦2. Мусор ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦раствором ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+---+-----------+--------------------------------+----------------+--------------+---------------------+
¦ Дополнительные методы обеззараживания различных ¦
¦ объектов, зараженных или подозрительных на заражение ¦
¦ простейшими и гельминтами III - IV групп патогенности ¦
+---+-----------+--------------------------------+----------------+--------------+-----T---------------+
¦ 1 ¦Орошение ¦Поверхности в помещениях (пол, ¦Раствор карболо-¦ 5 ¦5-6 ч¦300 мл/кв.м ¦
¦ ¦или проти- ¦стены, двери, мебель, оборудова-¦вой кислоты ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦рание де- ¦ние) ¦Раствор лизола ¦ 10 ¦ ¦ ¦
¦ ¦зинфицирую-¦ ¦Раствор крезола ¦ 2 ¦ ¦ ¦
¦ ¦щим раство-¦ ¦Раствор хлорно- ¦ 20 ¦ ¦ ¦
¦ ¦ром с пос- ¦ ¦известкового ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ледующей ¦ ¦молока ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦влажной ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦уборкой ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+---+-----------+--------------------------------+----------------+--------------+-----+---------------+
¦ 2 ¦Погружение ¦Биологические материалы (кровь, ¦Раствор карболо-¦ 5 ¦5-6 ч¦Для твердых из ¦
¦ ¦в дезинфи- ¦фекалии, моча), в том числе от- ¦вой кислоты ¦ ¦ ¦расчета 1:2, ¦
¦ ¦цирующий ¦работанные пробы из объектов ¦Раствор лизола ¦ 10 ¦ ¦для жидких - ¦
¦ ¦раствор ¦внешней среды. ¦Раствор крезола ¦ 2 ¦ ¦1:1 ¦
¦ ¦ ¦Посуда лабораторная, предметные ¦Раствор хлорно- ¦ 20 ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦и покровные стекла, пипетки ¦известкового ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦молока ¦ ¦ ¦ ¦
+---+-----------+--------------------------------+----------------+--------------+-----+---------------+
¦ 3 ¦Кипячение ¦Посуда лабораторная, предметные ¦Раствор детер- ¦ 2 ¦ 30 ¦ ¦
¦ ¦ ¦и покровные стекла, пипетки ¦гента типа "Ло- ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦тос" ¦ ¦ ¦ ¦
¦---+-----------+--------------------------------+----------------+--------------+-----+----------------
Примечания:
1. Допускается обеззараживание кювет, штативов, канистр, полиэтиленовых мешков и отработанных проб путем заливки двойным объемом крутого кипятка в плотно закрытом сосуде.
2. Допускается использование других отечественных и зарубежных дезинфицирующих средств, зарегистрированных и разрешенных для применения в Республике Беларусь.
Приложение 4
к санитарным правилам
"Безопасность работы с
микроорганизмами
III - IV групп патогенности
и гельминтами"
БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД КОНТРОЛЯ
ЭФФЕКТИВНОСТИ РАБОТЫ ПАРОВОГО СТЕРИЛИЗАТОРА
1. Бактериологический контроль работы стерилизаторов проводят
после монтажа и ремонта аппаратуры, а также в процессе их
эксплуатации (плановый - 1 раз в месяц и при получении
неудовлетворительных результатов контроля).
Контроль эффективности работы стерилизаторов осуществляется
бактериологическим методом, используя биотесты на основании гибели
спор тест-культуры.
Биотесты представляют собой флаконы из стеклянной трубки для
лекарственных средств ФИ/1-5НС 1 ТУ 64-0709-10-88 (инсулиновые
флаконы) или чашечки из алюминиевой фольги (диск размером 14 мм с
луночкой - вдавление от неоточенного края карандаша), содержащие
высушенные споры тест-культуры Bac. Stearothermophilus ВКМ В-718,
помещенные в пакеты из упаковочной бумаги (ОСТ 42-21-2-85).
Упакованные тесты нумеруют и размещают в контрольные точки паровых
стерилизаторов (5 - 10 тестов). По окончании стерилизации биотесты
подвергают бактериологическому исследованию.
2. Штамм Bac. Stearothermophilus ВКМ В-718 - подвижная
термофильная палочка, по Граму окрашивается положительно,
культивируется при t = (55 +/- 1) °C, исключающей развитие других
широко распространенных микроорганизмов. Споры овальные,
расположенные центрально. На мясопептонном бульоне (pH (7,3 +/- 0,1)
через 24 ч образует помутнение среды, на мясопептонном агаре (pH
(7,3 +/- 0,1) - слабо выпуклые колонии диаметром 2 - 4 мм с ровным
краем. Штамм непатогенен для человека и животных.
3. Приготовление биотеста:
в ампулу с лиофилизированой культурой вносят 0,2 мл стерильной
водопроводной воды и оставляют в течение 30 мин при комнатной
температуре. 1 - 2 капли культуры засевают в 2 пробирки с бульоном
(МПБ. Хоттингера, питательный сухой) с 0,5% глюкозы. Суточную
бульонную культуру засевают в пробирки на скошенный агар
(Хоттингера, мясопептонный, сухой питательный). Для получения спор
культуру, выращенную на твердой питательной среде, смывают 5 мл
стерильной водопроводной воды и переносят во флаконы со скошенным
картофельно-пептонным агаром. Взвесь покачиванием флакона равномерно
распределяют по поверхности среды, инкубируют при 55 °С в течение 10
- 12 суток в наклонном положении агаром вверх. Для создания
достаточной влажности в термостат помещают открытые емкости с водой.
На 7, 10 и 12-е сутки проверяют интенсивность спорообразования.
Достаточным количеством считают 80 - 90 спор в поле зрения. Культуру
смывают стерильной дистиллированной водой. С целью освобождения от
вегетативных клеток суспензию прогревают в водяной бане при
температуре 65 - 70 °С в течение 30 мин, центрифугируют трехкратно с
частотой вращения 2000 об./мин по 15 мин, промывая осадок стерильной
дистиллированной водой после каждого центрифугирования. Отмытые
споры суспендируют в стерильной дистиллированной воде в соотношении
1:1 по объему. Суспензию спор хранят в холодильнике при температуре
4 °C в стерильных пробирках, закрытых ватно-марлевыми пробками с
резиновыми колпачками (срок хранения - 2 года). Чистоту культуры на
всех этапах культивирования контролируют высевом на агаровые
пластинки. Для определения титра жизнеспособных спор 0,1 мл исходной
7
суспензии десятикратно разводят до 10 стерильной
дистиллированной водой, высевая на три агаровые пластинки по 0,1 мл
5 7
ориентировочно из 10 - 10 (предел разведения зависит от титра
полученных спор). Посевы инкубируют в течение 48 ч, проводят подсчет
выросших колоний. Титр жизнеспособных спор в исходной суспензии
определяют как среднее арифметическое число колоний с учетом
разведения исходной суспензии и объема пробы для посева.
Пример расчетов. Предположим, что при посеве на 3 чашки Петри с
5
агаром суспензии в разведении 1:100000 (10 ) подсчитано 140, 110
6
и 134 колонии. Аналогичные высевы из разведений 10 привели к
7
образованию 12, 14 и 16 колоний; из 10 - 5, 3 и 7 колоний.
Вычисляем общее число колоний, а затем среднее количество колоний
для каждого разведения - 128, 14 и 5.
Из расчета посевной дозы (0,1 мл на каждую чашку) вычисляем
титры жизнеспособных спор в 1 мл исходной суспензии с учетом
разведения, далее находим среднее арифметическое число колоний:
5 7
128 x 10 x 10 = 12,8 x 10 ;
6 7
14 x 10 x 10 = 14,0 x 10 ;
7 7
5 x 10 x 10 = 50,0 x 10 .
Таким образом, титр исходной суспензии составит (12,8 + 14,0 +
7 8
+ 50,0) x 10 / 3 = 2,5 x 10 спор в 1 мл. Исходная суспензия
7 8
должна содержать не менее 2,5 x 10 - 2,5 x 10 спор в 1 мл.
5 6
Споры в количестве 5 x 10 - 5 x 10 вносят из исходной
суспензии с помощью дозатора пипеточного (ТУ 64-1-3329-81) в 0,02 мл
в носители (стерильные инсулиновые флакончики с ватно-марлевой
пробкой или чашечки из алюминиевой фольги, разложенные в чашки
Петри), подсушивают в термостате при температуре 37 °С или в
эксикаторе над осушителем (силикогель, хлористый кальций) при
комнатной температуре в течение 24 ч.
Для определения фактической обсемененности исследуют не менее 3
биотестов от каждой группы. Во флаконы (чашечки) вносят по 1,0 мл
стерильной дистиллированной воды (чашечки из алюминиевой фольги
отмывают в широкогорлых пробирках с бусами в 10,0 мл) и встряхивают
в течение 10 мин на аппарате для встряхивания жидкостей с
последующим высевом на 3 агаровые пластинки по 0,1 мл суспензии из 3
последовательных 10-кратных разведений.
4. Определение устойчивости спор тест-культур к действию
водяного насыщенного пара под избыточным давлением проводят при
температуре (120 +/- 2) °С.
Биотесты в упаковочной бумаге помещают в стерилизационной
коробке в камеру парового стерилизатора. После набора давления в
водопроводной камере (0,11 +/- 0,01) МПа (1,1 +/- 0,1) кгс/кв.см)
проводят продувку парового стерилизатора (вытеснение воздуха паром
из камеры парового стерилизатора) в течение 10 мин при открытом
спускном кране и давлении в стерилизационной камере от 0,01 до 0,02
МПа (от 0,1 до 0,2 кгс/кв.см). После продувки доводят давление пара
в стерилизационной камере до (0,11 +/- 0,01) МПа (1,1 +/- 0,1)
кгс/кв.см), температуру (120 +/- 2) °С, и через 5 мин (время
выживания спор тест-культуры) с момента установления давления
спускают пар. Для уменьшения времени воздействия пара до и после
экспозиции подъем давления проводят максимум в течение 8 мин, спуск
- в течение 3 мин.
Аналогичное исследование проводят в течение 15 мин выдержки
(время гибели спор тест-культуры). Контроль температуры осуществляют
максимальными термометрами. По окончании времени выдержки биотесты
вынимают из стерилизатора и проводят бактериологическое
исследование.
Партию биотестов считают годными для использования, если
показатели устойчивости спор тест-культуры соответствуют
вышеописанным требованиям.
5. Для определения эффективности работы стерилизатора в
обеззараженные биотесты и контрольный тест (без стерилизации)
стерильно вносят по 5 мл питательной среды, инкубируют при 55 °C в
течение 7 суток при ежедневном просмотре посевов, делая высевы на
агаровые пластинки из проросших емкостей.
При использовании полусинтетической среды с индикатором
феноловым красным рост тест-культуры определяют по изменению
красного цвета среды (pH (7,7 +/- 0,1) на желто-оранжевый (pH (6,7
+/- 0,1) за счет разложения глюкозы с образованием кислоты. В целях
исключения ложного отрицательного результата (при наличии роста
тест-культуры отсутствует изменение цвета питательной среды) флаконы
(пробирки) должны быть плотно закрыты стерильными резиновыми
пробками (N 7,5; 12,5).
Отсутствие роста тест-культуры указывает на эффективность
работы стерилизатора. Рост других культур микроорганизмов относят за
счет вторичного обсеменения. При наличии роста тест-штаммов
проводится повторный контроль на удвоенном количестве биотестов.
Если и при повторной проверке тест-культуры не инактивируются,
осуществляют тщательный контроль технического состояния аппарата и
контрольно-измерительных приборов. При отсутствии роста
тест-культуры в контрольном биотесте (не подвергшемся стерилизации)
устанавливается причина (нежизнеспособность тест-культуры,
несоблюдение методики приготовления биотестов, питательных сред,
условий культивирования).
6. Для спорообразования используют:
- картофельно-пептонный агар (пептон - 5,0; мел - 1,0; агар -
25,0; картофельная вода - 1000,0 мл), pH - (7,1 +/- 0,1). Сырой
картофель (200,0 г очищенного картофеля на 1 л водопроводной воды)
тщательно моют, очищают от кожуры и глазков, нарезают мелкими
ломтиками, заливают водопроводной водой и кипятят 30 мин после
закипания (молодой картофель употреблять нельзя). Отвар отстаивают и
фильтруют в холодном состоянии через ватно-марлевый фильтр. Доводят
объем фильтрата до первоначального. Устанавливают pH (7,1 +/- 0,1).
Добавляют пептон и агар. Нагревают, помешивая до полного растворения
агара, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, после чего добавляют
мел. Разливают по флаконам, стерилизуют при 120 °С в течение 30 мин.
После стерилизации среду во флаконах скашивают;
пшеничный агар (пшеничная крупа "Артек" или "Полтавская" -
500,0; агар - 25,0; дистиллированная вода - 1000,0 мл),
pH (7,3 +/- 0,1).
Пшеничную крупу "Артек" ("Полтавская") заливают
дистиллированной водой. Через 12 ч настой аккуратно сливают, не
выжимая, доводят до первоначального объема, добавляют агар и
растапливают на водяной бане или в автоклаве (текучим паром 1 ч).
Остывший агар выкладывают на противень и срезают осадок. Агар
растапливают на водяной бане, постоянно помешивая. Устанавливают
pH (7,3 +/- 0,1). Разливают во флаконы. Стерилизуют текучим паром по
1 ч в течение 3 суток. После стерилизации среду скашивают.
7. Для контроля используют бульон Хоттингера - pH (7,3 +/-
0,1), агар Хоттингера - pH (7,3 +/- 0,1), питательный бульон сухой -
pH (7,1 +/- 0,1), среду питательную для контроля стерильности сухую
- pH (7,0 +/- 0,1), бульон из перевара кровяных сгустков,
полусинтетическую среду с индикатором феноловым красным - pH
(7,7+-0,1) (аммоний фосфорнокислый однозамещенный NH H PO - 1,0 г;
4 2 4
магний сернокислый MgSO - 0,2 г; калий хлористый KCl - 0,2 г;
4
глюкоза - 5,0 г; феноловый красный - 0,02 г; бульон Хоттингера с
содержанием аминного азота 140 - 160 мг - 200,0 мл; дистиллированная
вода - 800,0 мл - pH (7,7 +/- 0,1); компоненты смешивают и
растворяют при нагревании на водяной бане, доводят pH до (7 +/-
0,1), разливают во флаконы, стерилизуют при 110 °С в течение 30
мин).
Приложение 5
к санитарным правилам
"Безопасность работы с
микроорганизмами
III - IV групп патогенности
и гельминтами"
Страницы: | Стр.1 | Стр.2 | Стр.3 | Стр.4 |
| 
