Стр. 2
Страницы: | Стр.1 | Стр.2
78. Методы выделения ДНК из бактериальной суспензии.
Для повышения эффективности метода ПЦР-диагностики, особенно в случаях с низкой концентрацией возбудителей в СМЖ, необходимо проводить выделение ДНК из пробы:
с использованием стандартных наборов для выделения ДНК (в соответствии с инструкцией по применению);
метод температурного лизиса-осаждения (проводят цикл замораживания-оттаивания, кипятят в течение 3 минут, центрифугируют при 10000 g в течение 5 мин, для исследования используют 15 мкл образцов).
Концентрацию выделенной ДНК в пробе при необходимости определяют спектрофотометрически при длине волны 260 нм.
79. Приготовление реакционной смеси для проведения ПЦР и проведение полимеразной цепной реакции.
Приготовление реакционной смеси для проведения ПЦР (выбор температурного режима) проводят в соответствии с инструкцией.
80. Визуализация продуктов амплификации методом электрофореза.
Наличие продуктов амплификации ДНК выявляют электрофорезом в 1% агарозном геле с этидия бромидом (0,5 мкг/мл).
Приложение 1
к Инструкции о методах
микробиологической диагностики
менингококковой инфекции и
бактериальных менингитов
КУЛЬТУРАЛЬНЫЕ И БИОХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА НЕЙССЕРИЙ
И M.CATARRHALIS
----------------+---------------------+---------+--------+---------------------------+---------+-------------¬
¦Возбудтель ¦Отношение к условиям ¦Зависи- ¦Образо- ¦Сахаралитическая активность¦Образова-¦Редукция ¦
¦ ¦культивирования ¦мость ¦вание ¦ ¦ние поли-¦ ¦
¦ +---------------------+роста от ¦пигмента¦ ¦сахарида +------+------+
¦ ¦Рост на ¦CO2 при ¦ ¦ ¦на агаре ¦нитра-¦нитри-¦
¦ +-------+-------+-----+первичном¦ +----+-----T-----+----T-----+с 5% ¦тов ¦тов ¦
¦ ¦сыворо-¦бес- ¦среде¦выделении¦ ¦глю-¦маль-¦саха-¦лак-¦фрук-¦сахарозы ¦ ¦ ¦
¦ ¦точном ¦сыворо-¦с ¦ ¦ ¦коза¦тоза ¦роза ¦тоза¦тоза ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦агаре ¦точном ¦0,2% ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦37 ¦агаре ¦желчи¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦град. C¦37 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦град. C¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+---------------+-------+-------+-----+---------+--------+----+-----+-----+----+-----+---------+------+------+
¦N. gonorrhoeae ¦ + ¦ - ¦ - ¦ + ¦ - ¦ К ¦ - ¦ - ¦ - ¦ - ¦ - ¦ - ¦ - ¦
+---------------+-------+-------+-----+---------+--------+----+-----+-----+----+-----+---------+------+------+
¦N. meningitidis¦ + ¦ - ¦ - ¦ + ¦ - ¦ К ¦ К ¦ - ¦ - ¦ - ¦ - ¦ - ¦ - ¦
+---------------+-------+-------+-----+---------+--------+----+-----+-----+----+-----+---------+------+------+
¦N. subflava ¦ + ¦ + ¦ + ¦ - ¦ + ¦ К ¦ К ¦ - ¦ - ¦ - ¦ - ¦ - ¦ + ¦
+---------------+-------+-------+-----+---------+--------+----+-----+-----+----+-----+---------+------+------+
¦N. perflava ¦ + ¦ - ¦ + ¦ - ¦ + ¦ К ¦ К ¦ К ¦ - ¦ К ¦ + ¦ - ¦ + ¦
+---------------+-------+-------+-----+---------+--------+----+-----+-----+----+-----+---------+------+------+
¦N. flava ¦ + ¦ (+) ¦ + ¦ - ¦ + ¦ К ¦ К ¦ К ¦ - ¦ К ¦ + ¦ - ¦ + ¦
¦N. sicca ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+---------------+-------+-------+-----+---------+--------+----+-----+-----+----+-----+---------+------+------+
¦N. mucosa ¦ + ¦ + ¦ + ¦ - ¦ - ¦ К ¦ К ¦ К ¦ - ¦ К ¦ + ¦ + ¦ + ¦
+---------------+-------+-------+-----+---------+--------+----+-----+-----+----+-----+---------+------+------+
¦N. flavescens ¦ + ¦ + ¦ + ¦ - ¦ + ¦ - ¦ - ¦ - ¦ - ¦ - ¦ + ¦ - ¦ + ¦
¦ ¦ ¦ (-) ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+---------------+-------+-------+-----+---------+--------+----+-----+-----+----+-----+---------+------+------+
¦N.lactamica ¦ + ¦ + ¦ + ¦ - ¦ + ¦ К ¦ К ¦ - ¦ К ¦ - ¦ - ¦ + ¦ + ¦
+---------------+-------+-------+-----+---------+--------+----+-----+-----+----+-----+---------+------+------+
¦N. (Br.) ¦ + ¦ + ¦ + ¦ - ¦ - ¦ - ¦ - ¦ - ¦ - ¦ - ¦ - ¦ - ¦ + ¦
¦catarrhalis ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦---------------+-------+-------+-----+---------+--------+----+-----+-----+----+-----+---------+------+-------
Примечание. К - образование кислоты, (-) - редко.
Приложение 2
к Инструкции о методах
микробиологической диагностики
менингококковой инфекции и
бактериальных менингитов
СВОЙСТВА ОСНОВНЫХ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ МЕНИНГИТОВ, УЧИТЫВАЕМЫЕ
ЧЕРЕЗ 24 ЧАСА ОТ НАЧАЛА БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ
--------------+---------------+----------+-----T-----------------+--------------¬
¦Морфология ¦Интенсивность ¦Изменение ¦Грам ¦Наличие ¦Подозреваемые ¦
¦клеток ¦роста на агаре ¦цвета ¦ок- ¦ ¦микроорганизмы¦
¦ +-------+-------+"шоколад- ¦раска+-----+-----T-----+ ¦
¦ ¦20% ¦"шоко- ¦ного" ¦ ¦окси-¦ката-¦уреа-¦ ¦
¦ ¦сыворо-¦ладном"¦агара ¦ ¦дазы ¦лазы ¦зы ¦ ¦
¦ ¦точном ¦ ¦вокруг ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦колонии ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+-------------+-------+-------+----------+-----+-----+-----+-----+--------------+
¦Капсульные ¦ ++++ ¦ ++++ ¦ - ¦ - ¦ + ¦ + ¦ - ¦Neisseria ¦
¦полиморфные ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦meningitidis ¦
¦кокки ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+-------------+-------+-------+----------+-----+-----+-----+-----+--------------+
¦Мелкие ¦ - ¦ ++++ ¦ - ¦ - ¦ - ¦ + ¦ + ¦Haemophilus ¦
¦полиморфные ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦influenzae ¦
¦палочки ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+-------------+-------+-------+----------+-----+-----+-----+-----+--------------+
¦Капсульные ¦ ++++ ¦ ++++ ¦желто- ¦ + ¦ - ¦ - ¦ - ¦Streptococcus ¦
¦удлиненные ¦ ¦ ¦зеленый ¦ ¦ ¦ ¦ ¦pnenmoniae ¦
¦парные кокки ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+-------------+-------+-------+----------+-----+-----+-----+-----+--------------+
¦Цепочки и ¦ ++++ ¦ ++++ ¦зеленый ¦ + ¦ - ¦ - ¦ - ¦Streptococci ¦
¦пары из ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦B, D, viridans¦
¦кокков ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+-------------+-------+-------+----------+-----+-----+-----+-----+--------------+
¦Мелкие ¦ ++++ ¦ ++++ ¦зелено- ¦ + ¦ - ¦ + ¦ - ¦Listeria ¦
¦палочки ¦ ¦ ¦коричневый¦ ¦ ¦ ¦ ¦monocytogenes ¦
¦"частоколом" ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦и под углом ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+-------------+-------+-------+----------+-----+-----+-----+-----+--------------+
¦Пары и ¦ ++++ ¦ ++++ ¦ - ¦ - ¦ - ¦ + ¦ + ¦Acinetobacter ¦
¦цепочки ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦calcoaceticus ¦
¦коккобактерий¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦-------------+-------+-------+----------+-----+-----+-----+-----+---------------
Приложение 3
к Инструкции о методах
микробиологической диагностики
менингококковой инфекции и
бактериальных менингитов
ДИФФЕРЕНЦИРУЮЩИЕ СВОЙСТВА СТРЕПТОКОККОВ,
ВЫЗЫВАЮЩИХ МЕНИНГИТ
---------------+-------------+-----------+-------------+-----------¬
¦ ¦S.pneumoniae ¦S.faecalis ¦S.agalactiae ¦"Зеленящие"¦
¦ ¦ ¦ (гр. Д) ¦ (гр. B) ¦ ¦
+--------------+-------------+-----------+-------------+-----------+
¦Гемолиз на 5% ¦ а ¦ а, в, г ¦ в ¦ а ¦
¦кровяном агаре¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+--------------+-------------+-----------+-------------+-----------+
¦CAMP - тест ¦ - ¦ - ¦ + ¦ - ¦
+--------------+-------------+-----------+-------------+-----------+
¦Лизис на ¦ + ¦ - ¦ - ¦ - ¦
¦кровяном агаре¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦вокруг диска с¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦20% желчью ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+--------------+-------------+-----------+-------------+-----------+
¦Pocт после ¦ - ¦ + ¦ - ¦ - ¦
¦прогрева при ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦60 град. C, ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦30 мин. ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+--------------+-------------+-----------+-------------+-----------+
¦Разложение ¦ + или - ¦ + ¦ - ¦ - ¦
¦маннита ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+--------------+-------------+-----------+-------------+-----------+
¦Тест с ¦ + ¦ - ¦ - ¦ - ¦
¦оптохином ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦--------------+-------------+-----------+-------------+------------
--------------------------------
а - греческая буква "альфа"
в - греческая буква "бета"
г - греческая буква "гамма"
Примечание. В группу "зеленящих" стрептококков относятся 9 видов малоизученных стрептококков. Примерно 5% пневмококков резистентны к оптохину. Некоторые штаммы стрептококков, обозначаемые как "viridans", могут ингибироваться оптохином.
Страницы: | Стр.1 | Стр.2
| 
